番紅花球莖蛋白聚糖抗腫瘤研究及其在愈傷組織中的誘導.pdf

1、惡性腫瘤一直是全世界人類的主要致死原因，每年剝奪超過600萬人的生命。化療是目前治療惡性腫瘤的主要手段之一。雖然國內(nèi)外抗腫瘤藥眾多，但是大多數(shù)藥物都伴隨著嚴重的毒副作用，因此繼續(xù)尋找高效低毒的新型抗腫瘤藥物成為研究的熱點。從中藥活性成份中篩選治療癌癥的藥物是目前本領域研究的一個重要方面。
　　 本研究采用50 mM，pH8.0的三羥甲基氨基甲烷.鹽酸緩沖液(Tris-HCI)，其中含有1 mM的苯甲基磺酰氟(PMSF)、5 mM

2、的二硫蘇糖醇(DTT)對番紅花(Crocus sativus L.)球莖中的多糖進行提取，經(jīng)DEAE柱層析和反相HPLC，純化得到了一個單一的多糖組分。硫酚法和Folin-酚法結果表明該多糖中糖和蛋白質分別為94.88％和5.12％，該多糖屬于蛋白聚糖(proteoglycan，PG)。PMP衍生法和間羥聯(lián)苯法，檢測結果表明該蛋白聚糖是一個雜聚多糖，主要由鼠李糖(28.03％)，半乳糖(13.14％)，巖藻糖(8.20％)，木糖(19.

3、31％)，甘露糖(23.40％)和糖醛酸(7.92％)組成。氨基酸自動分析儀結果表明該蛋白聚糖的蛋白質部分主要由Asp，Glu，Gly，Ala和Leu等5種氨基酸組成(占50％以上)。FTIR和13C核磁共振結果證明該蛋白聚糖具有典型的多糖和蛋白的結構官能團，并確定其主鏈可能為β-(1，4)-D甘露糖，側鏈包括β-(1，6)-D甘露糖及其他種類單糖，如鼠李糖等。
　　 蛋白聚糖的體內(nèi)外抗腫瘤作用進行了初步研究。SRB法體外毒性試

4、驗結果表明，該蛋白聚糖對腫瘤細胞具有強烈的體外殺傷作用，對人肺癌A549細胞，人子宮頸癌Hela細胞，人肝癌SMMC-7721細胞，人乳腺癌MCF7細胞，人胃癌SGC-7901細胞等5種人組織來源的腫瘤細胞和1種鼠源的肉瘤S180細胞的ICso在10-40μg/ml之間。進一步的研究表明，該蛋白聚糖(PG)引起的細胞毒性機理在于：PG減少S180細胞的胞內(nèi)活性氧含量(ROS)，將細胞周期阻滯在GO/G1期，隨后發(fā)生細胞凋亡，引起細胞膜結

5、構完整性的變化，最終導致細胞的死亡。利用建立的S180荷瘤小鼠模型，通過三種給藥方式(腹腔注射給藥，靜脈注射給藥和瘤內(nèi)注射給藥)連續(xù)給藥10天，觀察20天內(nèi)，蛋白聚糖對小鼠體重、瘤體積的影響，20天后處死小鼠，取出瘤塊，計算抑瘤率，結果表明3種給藥方式都具0.4mg kg-1day-1被推薦為以后研究的手段。
　　 本研究建立了番紅花球莖愈傷組織誘導體系，確定其最佳的培養(yǎng)條件為：球莖芽點周圍表皮為外植體，在MS+5.0 mg/L