核心蛋白聚糖在腎小管間質損害中的作用.pdf

1、腎小球硬化和腎小管間質纖維化(tubulointerstitial．fibrosis，TIF)是大多數終末期腎臟的共同病理特征。腎小球細胞外基質沉積被認為是進展性腎小球疾病的首要特征。近年來認識到，TIF及細胞外基質沉積與腎功能進行性下降最終導致腎功能衰竭有明顯的相關性。TIF是各種原發(fā)性或繼發(fā)性腎臟疾病持續(xù)發(fā)展，導致腎臟正常組織結構被破壞并被細胞外基質所取代，腎臟功能不可逆損害的病理過程。無論是腎小球疾病還是小管間質性疾病及腎血管疾病

2、，腎功能的損害程度均與小管間質病變的程度密切相關?？梢哉f，腎小管間質病變程度是反映腎功能下降嚴重程度和判斷預后的重要指標之一。TIF是由多種分子與多種靶細胞相互作用的復雜過程。其中，單核細胞浸潤，細胞外基質的增生，腎小管上皮細胞轉分化及凋亡被認為是影響腎臟纖維化病變的重要方面。轉化生長因子β<,1>(TGFβ<,1>)是被公認的致纖維化因子之一。它通過多種途徑增加細胞外基質的積聚，從而導致腎間質纖維化。因此積極尋找能特異抑制TGFβ<,

3、1>過度表達或抑制其活性的物質成為阻止小管間質纖維化的重要研究之一。 核心蛋白聚糖(Decorin)是蛋白聚糖(PG)家族中的一員，由一條氨基端的糖胺聚糖鏈共價連接于核心蛋白部分所組成。近年研究顯示，Decorin的代謝異常或結構改變與許多疾病的病理過程有密切關系。Decorin不僅能影響毛細血管的形成、細胞的存活、纖維結構的穩(wěn)定性及與細胞外基質成分相互作用，Decorin還是TGFβ<,1>的天然拮抗劑。它通過多種方式影響細胞

4、因子、膠原、成纖維細胞、單核細胞等調節(jié)纖維化的進程，從而在抑制腎臟纖維化，延緩腎臟疾病進展中發(fā)揮作用。為了進一步探討Decorin與TGFβ<,1>的關系，以及Decorin對TGFβ<,1>誘導的腎小管上皮細胞轉分化和膠原合成的影響，我們進行了下面兩部分研究。 第一部分核心蛋白聚糖在腎組織中的表達和定位及與轉化生長因子表達的關系 目的：觀察Decorin在腎臟病患兒腎活檢組織中的定位及表達，并探討其與腎小管間質損害程度

5、及TGFβ<,1>之間的關系。 方法：收集36例腎臟疾病患兒腎活檢病理及臨床資料，根據腎小管間質損害程度級別進行分組，其中，輕度損傷組10例，中度損傷組13例和重度損傷組13例。應用免疫組織化學方法檢測Decorin和TGFβ<,1>在腎小管間質內的定位及表達。 結果：Decorin主要表達于腎小管上皮細胞、腎間質纖維化的部位及硬化的腎小球周圍包曼氏囊部位，隨著腎問質損害程度的加重，Decorin的表達量逐漸增加。輕度損

6、傷組、中度損傷組和重度損傷組三組間有顯著性差異(P<0.05)。TGFβ<,1>的表達主要見于腎小管上皮細胞和腎間質纖維化的部位，它的表達量也隨著腎小管間質損害程度的加重而增加，三組間有顯著性差異(P<0.05)。Decorin和TGFβ<,1>兩者表達量呈正相關。 結論：(1)Decorin主要表達于腎小管上皮細胞、腎間質纖維化的部位及硬化的腎小球周圍包曼氏囊部位，隨著腎間質纖維化程度的加重，Decorin的表達量增加并與TG

7、Fβ<,1>的表達量呈正相關。 第二部分核心蛋白聚糖對TGFβ<,1>誘導的人腎小管上皮細胞轉分化及膠原合成的影響 目的：探討Decorin對TGFβ<,1>誘導的人近端腎小管上皮細胞(HK-2)轉分化的影響；觀察Decorin對TGFβ<,1>誘導的HK-2細胞Ⅰ、Ⅲ型膠原表達的影響。 方法：將體外培養(yǎng)的HK-2細胞分為6組：A朋性對照組；B.10ng/mlTGFβ<,1>組；C.10ng/ml Decorin

8、組；D.100ng/ml Decorin組；E.10ng/ml TGFβ<,1>+10ng/ml Decorin組；F.10ng/ml TGFβ<,1>+100ng/mlDecorin組。培養(yǎng)48h后，倒置顯微鏡下觀察各組細胞的形態(tài)學變化。應用逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測HK-2細胞內α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)、波形蛋白、角蛋白、Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA水平的表達；應用蛋白印跡技術(western-blot)和細胞免疫組化

9、方法觀察不同濃度的Decorin對HK-2細胞Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白水平表達變化的影響。 結果：(1)A組、C組和D組細胞形態(tài)無明顯變化，大部分細胞仍為橢圓形；A、C、D三組中，α-SMA、波形蛋白、角蛋白mRNA表達無顯著性差異(P>0.05)。B組 HK-2細胞形態(tài)發(fā)生明顯變化，大部分細胞拉長呈梭形，波形蛋白、α-SMA mRNA表達明顯提高，角蛋白mRNA表達減少，與A組相比較有顯著性差異(P<0.05)。E組和F組，梭形樣細胞

10、明顯減少，尤其是F組梭形樣細胞減少更明顯，波形蛋白、α-SMA．mRNA表達有所下降，角蛋白mRNA表達呈上升趨勢，與B組相比較有顯著性差異(P<0.05)，其中E組和F組兩組間亦有顯著性差異(P<0.05)。(2)B組與A相比較，HK-2細胞Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA及蛋白質的表達量明顯增多；加入不同濃度的Decorin后，Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA及蛋白質的表達與單獨TGFβ1組相比有不同程度的減少，且E組和F組相比較，兩組間差異顯著(P<0.