蛋白聚糖Ⅱ重組腺病毒載體對(duì)糖尿病視網(wǎng)膜病變的作用.pdf

1、研究背景和目的:糖尿病視網(wǎng)膜病變(DR)是糖尿病最為常見和嚴(yán)重的微血管并發(fā)癥,已成為四大主要致盲因素之一.隨著人民生活水平的提高,糖尿病發(fā)病率急劇上升,盡管在用激光光凝和玻切手術(shù)治療DR方面取得了進(jìn)展,但是糖尿病患者失明的危險(xiǎn)性仍然比正常人高25倍.因此,研究DR的發(fā)病機(jī)制對(duì)防治該病具有重要意義.近來研究表明DR的發(fā)生發(fā)展與細(xì)胞增殖調(diào)控失常有關(guān),而生長(zhǎng)因子與視網(wǎng)膜多種細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖有密切關(guān)系,在諸多影響視網(wǎng)膜微血管病變的細(xì)胞因子中,轉(zhuǎn)化

2、生長(zhǎng)因子β(TGF-β)已經(jīng)得到肯定.TGF-β是一種多功能的細(xì)胞間信號(hào)蛋白,具有多種生物學(xué)效應(yīng),在糖尿病視網(wǎng)膜病變發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮的作用也十分復(fù)雜,主要通過對(duì)細(xì)胞增殖分化和細(xì)胞外基質(zhì)的影響,促進(jìn)新生血管腔形成,參與細(xì)胞凋亡等發(fā)揮作用,并與其他生長(zhǎng)因子協(xié)調(diào)共同作用等. 蛋白聚糖Ⅱ,又稱decorin(DCN),是內(nèi)源存在的蛋白聚糖,通過參與調(diào)控細(xì)胞的增殖、分化,調(diào)節(jié)基質(zhì)形成、膠原纖維的結(jié)構(gòu)和生成速度,發(fā)揮抗纖維化,抑制新生血管

3、形成等的作用.Decorin不僅可以結(jié)合TGF-β2,抑制其生物活性,而且能夠抑制TGF-β2mRNA的轉(zhuǎn)錄和翻譯,減少TGF-β2的表達(dá).Border等的實(shí)驗(yàn)證明注射一定劑量的Decorin均能使TGF-β1,TGF-β2,TGF-β3活性降低,從而阻斷TGF-β與其受體的相互作用,達(dá)到抑制纖維化的目的.外源性補(bǔ)充decorin在糖尿病視網(wǎng)膜病變中日益受到重視. 基因治療具有巨大的開發(fā)潛力及應(yīng)用前景,將外源性的基因?qū)肷锛?xì)胞

4、有許多技術(shù)方法或載體.為進(jìn)一步研究TGF-β2在DR發(fā)生發(fā)展過程的表達(dá)變化以及外源性增加decorin是否對(duì)TGF-β 2的作用,本實(shí)驗(yàn)利用大鼠DCN重組腺病毒載體(本實(shí)驗(yàn)成員前期已構(gòu)建并鑒定)感染糖尿病大鼠,觀察不同時(shí)間點(diǎn)TGF-β 2Mrna表達(dá)變化及外源性增加decorin是否對(duì)TGF-β2發(fā)揮作用,為臨床預(yù)防、治療糖尿病視網(wǎng)膜病變提供一種可能方法. 因此設(shè)計(jì)并進(jìn)行如下實(shí)驗(yàn): 1.鏈脲佐菌素制備大鼠糖尿病模型,于造

5、模成功后8W注射DCN重組腺病毒載體感染糖尿病動(dòng)物模型,并注射相同劑量的ad-LacZ的作為對(duì)照組,分別于8W,12W,16W,20W測(cè)血糖和體重,并取視網(wǎng)膜標(biāo)本進(jìn)行實(shí)驗(yàn). 2.利用RT-PCR方法檢測(cè)各組不同時(shí)間點(diǎn)TGF-β2mRNA的表達(dá).實(shí)驗(yàn)結(jié)果: 1)各組血糖及體重的變化:各時(shí)間點(diǎn)糖尿病組及ad-DCN,ad-LacZ組大鼠體重與正常對(duì)照組相比,差異有顯著意義.正常對(duì)照組大鼠血糖較平穩(wěn)各時(shí)間點(diǎn)比較差異無顯著意義,

6、糖尿病組,ad-DCN及ad-LacZ組大鼠血糖維持在高水平,與正常對(duì)照組比較,差異有顯著意義.糖尿病組與ad-DCN組、ad-LacZ組的血糖與體重水平無明顯差異. 2)各組不同時(shí)期的TGF-β2mRNA的表達(dá):與正常對(duì)照組相比,糖尿病組,ad-DCN及ad-LacZ組大鼠視網(wǎng)膜中TGF-β2mRNA的表達(dá)于8W時(shí)下降,12周時(shí)糖尿病組,ad-DCN組與ad-LacZ組大鼠視網(wǎng)膜中TGF-β2mRNA的表達(dá)高于正常對(duì)照組,且差

7、異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但12周時(shí)AD-DCN組大鼠視網(wǎng)膜中TGF-β2mRNA的表達(dá)低于糖尿病組與ad-LacZ組.在16周和20周時(shí)糖尿病組,ad-DCN組與ad-LacZ組大鼠視網(wǎng)膜中TGF-β2mRNA的表達(dá)繼續(xù)升高,高于正常組,ad-DCN組大鼠視網(wǎng)膜中TGF-β2mRNA的表達(dá)低于糖尿病組與ad-LacZ組. 結(jié)論: 1.糖尿病大鼠視網(wǎng)膜TGF-β2早期有所下降,可能是周細(xì)胞數(shù)目減少導(dǎo)致TGF-β2分泌下降造成,于1