人腎母細(xì)胞瘤裸小鼠腎原位移植模型建立及維甲酸誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文人腎母細(xì)胞瘤裸小鼠腎原位移植模型建立及維甲酸誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)研究姓名：何小偉申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：兒科學(xué)（小兒外科）指導(dǎo)教師：高解春20030401學(xué)顯微鏡下觀察移植瘤組織形態(tài)學(xué)以及角質(zhì)蛋白18、波形蛋白和結(jié)蛋白的免疫組化染色特征。聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增基因組微衛(wèi)星序列D14S68、D18S69和D20S199，以確定其人源性。結(jié)果：裸小鼠皮下接種的人腎母細(xì)胞瘤均未成瘤，在腎原位接種的裸小鼠中形成腎原位移植瘤，系列傳四代，共

2、59只裸小鼠，其中58只在l腎原位可以檢測(cè)到移植瘤生長(zhǎng)。移植物接種后經(jīng)歷一個(gè)約4周的潛伏期，然后快速生長(zhǎng)，平均6天重量增長(zhǎng)一倍，生長(zhǎng)曲線符合指數(shù)模型：全部裸小鼠均未發(fā)現(xiàn)肺部轉(zhuǎn)移病灶；各傳代腫瘤和來源腫瘤細(xì)胞倍體數(shù)、細(xì)胞周期分布相似，所有移植瘤都保留了來源腫瘤的組織形態(tài)學(xué)和免疫組化染色特征。移植瘤基因組微衛(wèi)星DNA序列與來源腫瘤完全一致。結(jié)論：腎母細(xì)胞瘤裸小鼠腎原位移植瘤模型成瘤率高，具有來源腫瘤相似的惡性生氏特點(diǎn)。該原位移植模型在組織學(xué)

3、、免疫組織化學(xué)、分子遺傳學(xué)方面準(zhǔn)確的重現(xiàn)所來源的腫瘤的生物學(xué)和遺傳學(xué)特征，是進(jìn)行兒童實(shí)體瘤體內(nèi)自然增殖、分化、干預(yù)實(shí)驗(yàn)研究的一個(gè)可靠的工具。與腎母細(xì)胞瘤皮下移植模型相比，該模型腫瘤原位器官生長(zhǎng)的自然環(huán)境更確切的模擬腫瘤自然生長(zhǎng)過程，是一個(gè)更理想的wT研究平臺(tái)，具有更好的應(yīng)用前景。第二部分維甲酸對(duì)膂母細(xì)胞瘤的體內(nèi)誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)和杌制研究方法：選擇模型第四代荷瘤裸小鼠30只，均分兩組，一組裸小鼠(n=15)在接種后3周開始給予經(jīng)口喂飼維甲酸3

4、0mg／kgd，對(duì)照組(n=15)給予等量芝麻油；分別在接種后4、5、6、7、8周處死和解剖裸小鼠，觀察維甲酸對(duì)裸小鼠的影響，包括飲食、飲水、反應(yīng)性和兩組裸小鼠體重變化；檢測(cè)維甲酸對(duì)移植瘤生長(zhǎng)和增殖的影響，包括直接測(cè)量移植瘤重和流式細(xì)胞檢測(cè)增殖指數(shù)；觀察移植瘤形態(tài)學(xué)和超微結(jié)構(gòu)的改變：逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)腫瘤組織中IGF2和H19基因的轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果：維甲酸干預(yù)實(shí)驗(yàn)過程中沒有出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)鼠死亡、反應(yīng)性和食欲異常改變。治療組和對(duì)照組裸小鼠體

5、重?zé)o顯著差異cp，O05)；維甲酸治療組裸小鼠移植瘤重量增長(zhǎng)和增殖指數(shù)PI均顯著低于對(duì)照組◇O05)。兩組移植瘤光鏡下組織學(xué)類型為胚基一上皮混合型，無明顯的形態(tài)學(xué)改變；與對(duì)照組相比，電鏡下顯示治療組移植瘤呈現(xiàn)分化表現(xiàn)，出現(xiàn)～些發(fā)育成熟的結(jié)構(gòu)如微絨毛、基底膜等；兩組移植瘤都擴(kuò)增出IGF2mRNA，治療組IGF2mRNA灰度值O950301455，低于對(duì)照組的1070802375，但統(tǒng)計(jì)學(xué)比較差異無顯著意義。H19在兩組裸小鼠移植瘤瘤中都沒