人腎母細胞瘤裸小鼠腎原位移植模型建立及維甲酸誘導分化實驗研究.pdf

1、復旦大學博士學位論文人腎母細胞瘤裸小鼠腎原位移植模型建立及維甲酸誘導分化實驗研究姓名：何小偉申請學位級別：博士專業(yè)：兒科學（小兒外科）指導教師：高解春20030401學顯微鏡下觀察移植瘤組織形態(tài)學以及角質(zhì)蛋白18、波形蛋白和結蛋白的免疫組化染色特征。聚合酶鏈反應擴增基因組微衛(wèi)星序列D14S68、D18S69和D20S199，以確定其人源性。結果：裸小鼠皮下接種的人腎母細胞瘤均未成瘤，在腎原位接種的裸小鼠中形成腎原位移植瘤，系列傳四代，共

2、59只裸小鼠，其中58只在l腎原位可以檢測到移植瘤生長。移植物接種后經(jīng)歷一個約4周的潛伏期，然后快速生長，平均6天重量增長一倍，生長曲線符合指數(shù)模型：全部裸小鼠均未發(fā)現(xiàn)肺部轉(zhuǎn)移病灶；各傳代腫瘤和來源腫瘤細胞倍體數(shù)、細胞周期分布相似，所有移植瘤都保留了來源腫瘤的組織形態(tài)學和免疫組化染色特征。移植瘤基因組微衛(wèi)星DNA序列與來源腫瘤完全一致。結論：腎母細胞瘤裸小鼠腎原位移植瘤模型成瘤率高，具有來源腫瘤相似的惡性生氏特點。該原位移植模型在組織學

3、、免疫組織化學、分子遺傳學方面準確的重現(xiàn)所來源的腫瘤的生物學和遺傳學特征，是進行兒童實體瘤體內(nèi)自然增殖、分化、干預實驗研究的一個可靠的工具。與腎母細胞瘤皮下移植模型相比，該模型腫瘤原位器官生長的自然環(huán)境更確切的模擬腫瘤自然生長過程，是一個更理想的wT研究平臺，具有更好的應用前景。第二部分維甲酸對膂母細胞瘤的體內(nèi)誘導分化實驗和杌制研究方法：選擇模型第四代荷瘤裸小鼠30只，均分兩組，一組裸小鼠(n=15)在接種后3周開始給予經(jīng)口喂飼維甲酸3

4、0mg／kgd，對照組(n=15)給予等量芝麻油；分別在接種后4、5、6、7、8周處死和解剖裸小鼠，觀察維甲酸對裸小鼠的影響，包括飲食、飲水、反應性和兩組裸小鼠體重變化；檢測維甲酸對移植瘤生長和增殖的影響，包括直接測量移植瘤重和流式細胞檢測增殖指數(shù)；觀察移植瘤形態(tài)學和超微結構的改變：逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應檢測腫瘤組織中IGF2和H19基因的轉(zhuǎn)錄水平。結果：維甲酸干預實驗過程中沒有出現(xiàn)實驗鼠死亡、反應性和食欲異常改變。治療組和對照組裸小鼠體

5、重無顯著差異cp，O05)；維甲酸治療組裸小鼠移植瘤重量增長和增殖指數(shù)PI均顯著低于對照組◇O05)。兩組移植瘤光鏡下組織學類型為胚基一上皮混合型，無明顯的形態(tài)學改變；與對照組相比，電鏡下顯示治療組移植瘤呈現(xiàn)分化表現(xiàn)，出現(xiàn)～些發(fā)育成熟的結構如微絨毛、基底膜等；兩組移植瘤都擴增出IGF2mRNA，治療組IGF2mRNA灰度值O950301455，低于對照組的1070802375，但統(tǒng)計學比較差異無顯著意義。H19在兩組裸小鼠移植瘤瘤中都沒