HARV和微載體技術(shù)在胎兒BMSCs向軟骨細(xì)胞轉(zhuǎn)化中的應(yīng)用.pdf

1、目的：利用體外培養(yǎng)的技術(shù)原理，在高截面縱橫比容器(highaspectratiovessel，HARV)中應(yīng)用微載體技術(shù)和無(wú)血清完全培養(yǎng)基進(jìn)行胎兒骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bonemesenchymalstemcells，BMSCs)向軟骨細(xì)胞的誘導(dǎo)分化，以有效獲得表型正常的軟骨組織工程用功能細(xì)胞。方法：取引產(chǎn)胎兒骨髓懸液，經(jīng)Percoll密度梯度離心，獲取單個(gè)核細(xì)胞；以含10％胎牛血清低糖DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)，經(jīng)12～14天后獲得成纖維樣單層貼

2、壁的胎兒BMSCs；胰酶消化、傳代，取第3代的細(xì)胞經(jīng)流式細(xì)胞儀鑒定純度后，以其為種子細(xì)胞，1×107個(gè)細(xì)胞與Cytodex-3微載體充分混勻后，放入HARV中，在無(wú)血清完全培養(yǎng)基作用下誘導(dǎo)培養(yǎng)，分別于培養(yǎng)的7、14天取材，RT-PCR技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)Ⅱ型前膠原mRNA的表達(dá)水平；同時(shí)以培養(yǎng)瓶誘導(dǎo)培養(yǎng)作對(duì)照。結(jié)果：經(jīng)Percoll密度梯度離心所獲得的單個(gè)核細(xì)胞貼壁、擴(kuò)增、傳代后，流式細(xì)胞儀鑒定胎兒BMSCs的純度達(dá)95％以上；培養(yǎng)瓶誘導(dǎo)培養(yǎng)