河南省林州地區(qū)賁門癌臨床流行病學(xué)與血清蛋白組學(xué)研究.pdf

1、研究背景、目的和意義:賁門癌（GCA）是消化內(nèi)科常見的惡性腫瘤之一，定義為發(fā)生在食管胃交界線下約2cm范圍內(nèi)的腺癌，又稱為食管-胃交界腺癌。我國流行病學(xué)資料研究顯示，賁門癌和食管癌發(fā)病具有相似的地域分布特征，世界上食管癌(EC)和賁門癌(GCA)發(fā)病率和死亡率最高的地區(qū)位于河南省林州市及其毗鄰地區(qū)，其已成為腫瘤流行病學(xué)研究中最具有地域特點(diǎn)的案例。在林州地區(qū)及其毗鄰地區(qū)已經(jīng)進(jìn)行了大量的關(guān)于食道癌的臨床和基礎(chǔ)研究。歷史上我國曾將賁門癌歸入食

2、管癌統(tǒng)計(jì)，在上世紀(jì)80年代以后，按病理分類又將其歸入到胃癌中，但是賁門癌逐漸作為一個(gè)具有相對獨(dú)立病因、病理和臨床表現(xiàn)的腫瘤，被作為一個(gè)獨(dú)立的腫瘤用于臨床和研究。近30年來，賁門癌的發(fā)病率呈明顯上升趨勢，相比而言胃遠(yuǎn)部腫瘤的發(fā)病率呈明顯下降趨勢。
　　癌癥的發(fā)病是多種因素參與，涉及多次病變的過程，賁門癌也不例外。目前研究顯示賁門癌的發(fā)生主要與環(huán)境因素和遺傳因素有關(guān)。癌癥的分子生物學(xué)研究目前已經(jīng)取得了長足的進(jìn)步，癌基因和抑癌基因的發(fā)現(xiàn)

3、成為攻克癌癥道路上重要的成果，研究發(fā)現(xiàn)各種因素導(dǎo)致癌基因、抑癌基因和細(xì)胞凋亡基因的表達(dá)改變，破壞了賁門癌黏膜上皮細(xì)胞增殖和凋亡的動(dòng)態(tài)平衡，導(dǎo)致了賁門癌的發(fā)生。早期發(fā)現(xiàn)腫瘤是治療腫瘤、提高腫瘤手術(shù)后生存率的最重要因素之一，早期賁門癌患者術(shù)后5年生存率可達(dá)90％，相比之下患者預(yù)后中期和晚期較差。所以，責(zé)門癌患者預(yù)后的決定因素就是早期診斷，但是診斷早期賁門癌的生物學(xué)指標(biāo)有利于較早發(fā)現(xiàn)腫瘤并且進(jìn)行早期治療，其也成為賁門癌研究的方向和熱點(diǎn)之一。人

4、們期望探索和建立一種敏感性高、特異性強(qiáng)的賁門癌早期診斷指標(biāo)以及賁門癌預(yù)后預(yù)測指標(biāo)，并利用這些指標(biāo)作為指導(dǎo)治療和判斷預(yù)后的依據(jù)。蛋白質(zhì)組學(xué)的方法具有高通量，靈敏度高等特點(diǎn)，為臨床上認(rèn)識(shí)和診斷各種疾病提供了有力的手段?；|(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)是近年發(fā)展起來的一種高通量的蛋白組學(xué)研究方法，已經(jīng)有許多研究應(yīng)用MALDI-TOF-MS的方法對各種腫瘤進(jìn)行診斷和預(yù)后判斷。關(guān)于賁門癌(GCA)的蛋白組學(xué)研究報(bào)道較少

5、。本研究回顧性調(diào)查林州及其周邊地區(qū)賁門癌的流行病學(xué)資料;并在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步應(yīng)用一種新的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)——由功能磁珠、ANCHORCHIP技術(shù)、MALDI-TOF-MS和ClinProTools方法組成的ClinProt系統(tǒng)，檢測賁門癌高發(fā)區(qū)賁門癌患者血清蛋白表達(dá)譜，并建立與賁門癌患者密切相關(guān)的血清蛋白診斷模型，進(jìn)一步落實(shí)賁門癌的綜合防治措施，探討可能與賁門癌預(yù)后有聯(lián)系的候選血清蛋白就是有力的依據(jù)和手段。
　　材料與方法:采用家訪

6、和問卷調(diào)查、住院病歷核查以及電話隨訪等方法，收集整理2006年10月～2008年12月在林州市中心醫(yī)院和河南安陽市腫瘤醫(yī)院住院接受手術(shù)治療的賁門癌患者的臨床病理資料和部分隨訪結(jié)果，共入選責(zé)門癌447例。調(diào)查內(nèi)容包括患者診斷年齡，首發(fā)癥狀及持續(xù)時(shí)間、臨床病理類型、組織學(xué)類型及分化程度、TNM分期、家族史等臨床病理資料。取賁門癌患者(GCA)18例，正常對照組20例，收集血清經(jīng)Clinprot磁珠純化、基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MA

7、LDI-TOF-MS)分析建立相應(yīng)的蛋白質(zhì)指紋圖譜，采用ClinProTools生物信息學(xué)方法對其血清蛋白表的達(dá)譜進(jìn)行研究。通過對不同質(zhì)荷比(M/Z)的差異蛋白與數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對分析，篩選出與賁門癌發(fā)病相關(guān)的血清候選蛋白。抽取有明確生存期的賁門癌患者38例，分為生存期≤1年組，生存期≥3年組，收集血清經(jīng)Clinprot磁珠純化、基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)組成的Clinprot系統(tǒng)分析建立相應(yīng)的蛋白質(zhì)指紋圖

8、譜，應(yīng)用ClinProTools研究兩組患者血清蛋白表達(dá)譜。利用ClinProToolsTM建立不同生存期的賁門癌患者的血清差異蛋白平均圖譜，運(yùn)用分析軟件Clinprotools2.1分析組間差異。
　　主要結(jié)果:
　　1.河南林州地區(qū)賁門癌臨床病理特征及生存分析
　　賁門癌患者447例，其中男性334例，女性113例;男女比例為2.96∶1。賁門癌患者的平均診斷年齡58.60±8.80歲。男性患者平均診斷年齡57.4

9、7±9.04，女性患者平均診斷年齡61.97±8.05，男性發(fā)病年齡較女性早(t=-0.52，P=0.05)。447例責(zé)門癌患者中，51.0％(228/447)的患者首發(fā)癥狀表現(xiàn)為進(jìn)行性吞咽困難,25.1％(112/447)的患者首發(fā)癥狀表現(xiàn)為上腹飽脹不適，68.9％（162/228）進(jìn)行性吞咽困難的患者癥狀持續(xù)時(shí)間在2月以內(nèi)。賁門癌447例患者中，各年齡組中首發(fā)癥狀持續(xù)時(shí)間在8天至30天所占的比例最大(152/447)。各年齡組賁門癌

10、患者TNM分期構(gòu)成中TNMⅢ期所占的比例最大(265/447)。賁門癌447例患者中，72.7％(334/447)患者在就診后發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（包括影像學(xué)和手術(shù)后證實(shí)），僅27.3％(113/447)患者未發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。有明確病理類型者418例，其中早期賁門癌患者占14.4％(60/418)，中晚期賁門癌患者占85.6％(358/418)。96.7％(58/60)的早期賁門癌患者大體病理類型為隆起型，中晚期賁門癌患者最常見的大體病理類型

11、為潰瘍2型，占70.7％(253/358)。有35.8％(160/447)的患者家族中存在2個(gè)或2個(gè)以上（包括患者本人）食管癌或賁門癌患者。惡性腫瘤家族史與賁門癌診斷年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在賁門癌早期到中晚期患者的患病情況與診斷年齡相關(guān)性較弱;與其是否有有惡性腫瘤家族史無明顯的相關(guān)性與其父母或是愛人患惡性腫瘤的情況相關(guān)性也不明顯;但患者家族史中食管癌賁門癌患者的情況與患者的相關(guān)性相當(dāng)明顯，大體類型為中晚期的食管癌賁門癌家族史陽性率明顯高

12、于早期大體類型?；颊叩脑\斷年齡與組織學(xué)類型無明顯的相關(guān)性。賁門癌患者的診斷年齡與患者腫瘤的分化程度無太大關(guān)系。賁門癌患者的診斷年齡與患者的腫瘤分化程度的相關(guān)性不強(qiáng)。其腫瘤分化程度與家族惡性腫瘤史、家族食管癌賁門癌史均無明顯的相關(guān)性。
　　2.應(yīng)用ClinProt系統(tǒng)分析賁門癌患者與正常人差異表達(dá)蛋白質(zhì)譜圖
　　運(yùn)用液體蛋白芯片飛行時(shí)間質(zhì)譜系統(tǒng)檢測賁門癌患者血清蛋白表達(dá)譜，與正常人比較，在賁門癌組中篩選出13種蛋白表達(dá)上調(diào)，質(zhì)

13、荷比M/Z值分別為:M2369.93Da、 M2066.42Da、 M4980.31Da、 M2128.37Da、 M4964.22DaM4645.87Da、M2394.7Da、M4112.16Da、M8605.08Da、 M4591.45Da、 M4299.37DaM2444.97Da、M2899.63Da;7種蛋白表達(dá)下調(diào)，質(zhì)荷比M/Z值分別為:M1865.35Da、M1778.51Da、M1691.73Da、M1881.32Da、

14、 M5337.59Da、M5352.67Da、 M1450.46Da。
　　以質(zhì)荷比M/Z為M1865.35Da、M1778.51Da的2種蛋白質(zhì)作為分類變量建立分類預(yù)測模型，得到的平均值標(biāo)準(zhǔn)差、血清蛋白平均譜圖及差異蛋白表達(dá)的樣品分布圖，該2個(gè)蛋白峰在賁門癌組均值豐度明顯小于正常對照組，蛋白峰均值豐度在兩組血清樣本表現(xiàn)為具有顯著分布差異。
　　3.賁門癌患者生存期相關(guān)血清蛋白分析
　　在賁門癌患者血清中，隨著生存期延

15、長呈明顯升高趨勢的蛋白質(zhì)核比有22種，其中質(zhì)核比4112.16Da、4591.45 Da的蛋白表達(dá)上調(diào)并同時(shí)隨生存期的延長明顯增加;質(zhì)核比6649.86Da、8131.92Da、8288.51Da、3380.05Da、3472.8Da、3491Da、3505.84Da3772.08Da、5448.65Da、5988.04Da、2070.24Da、3446.47Da、3565.12Da、4067.61Da、4398.36Da、4744.1

16、7Da、6450.97Da、6609.99Da、6811.24Da、8937.92Da等20種蛋白隨著生存期延長呈明顯降低趨勢:在賁門癌患者中表達(dá)下調(diào)并且有利于生存的蛋白有2種:1866.57Da和1779.25Da;在賁門癌患者血清中特異表達(dá)并且不利于生存的蛋白分子量為4067.61Da和5448.65Da。在SWISS-PROT蛋白數(shù)據(jù)庫中檢索查詢與其相匹配的蛋白質(zhì)，作為預(yù)后相關(guān)的候選蛋白。
　　結(jié)論:
　　1.賁門癌患

17、者平均診斷年齡為58.60±8.80歲，男性多于女性，男性發(fā)病年齡較女性早。一半以上患者首發(fā)癥狀為進(jìn)行性吞咽困難，但年輕患者首發(fā)癥狀常表現(xiàn)為上腹不適、上腹痛等。大體病理類型為隆起型者就診早，潰瘍型者就診時(shí)多為中晚期。具有和不具有惡性腫瘤家族史的患者在診斷年齡，病理分型，大體分期和分化程度方面均無明顯差異。
　　2.ClinProt系統(tǒng)作為研究蛋白表達(dá)圖譜的工具，具有較好的重復(fù)性和精度;13種蛋白在賁門癌中表達(dá)上調(diào)，7種蛋白在賁門癌