氯通道在阿霉素跨細胞膜轉(zhuǎn)運中的作用.pdf

1、目的:1)研究氯通道在跨細胞膜轉(zhuǎn)運阿霉素中的作用;2)探討參與跨細胞膜轉(zhuǎn)運阿霉素的氯通道分子本質(zhì);3)探討內(nèi)源性ClC-3差異表達與藥物攝取及細胞藥物敏感性的相關(guān)性。
　　方法:以人低分化鼻咽癌細胞(CNE-2Z)及永生化人正常鼻咽上皮細胞(NP69-SV40T)細胞為實驗對象,1)全細胞膜片鉗技術(shù)記錄氯電流;2)熒光顯微示蹤法、熒光酶標儀檢測細胞內(nèi)阿霉素?zé)晒鈴姸?3)免疫熒光與Western Blot技術(shù)檢測ClC-3氯通道蛋白

2、表達;4)MTT法檢測細胞對阿霉素的敏感性;5)siRNA技術(shù)下調(diào)ClC-3氯通道蛋白表達。
　　結(jié)果:
　　1.細胞外灌流47％低滲液激活細胞氯通道。與基礎(chǔ)狀態(tài)相比,低滲狀態(tài)下鼻咽癌細胞與鼻咽上皮細胞內(nèi)阿霉素的熒光強度增強。
　　2.氯通道阻斷劑DIDS抑制低滲激活的CNE-2Z細胞和NP69-SV40T細胞氯電流,且可抑制低滲引起的促進阿霉素跨膜轉(zhuǎn)運的作用。
　　3.在一定的時間與濃度范圍內(nèi),CNE-2Z與

3、NP69-SV40T細胞對阿霉素的攝取隨時間和濃度的增加而增強,提示這兩種細胞對阿霉素的攝取呈非飽和狀態(tài)。
　　4.鼻咽癌細胞內(nèi)源性ClC-3氯通道蛋白表達高于鼻咽上皮細胞;電生理結(jié)果示阿霉素激活CNE-2Z細胞氯電流密度明顯高于NP69-SV40T細胞,同時,鼻咽癌細胞對阿霉素的攝取高于鼻咽上皮細胞。
　　5.干擾CNE-2Z細胞ClC-3氯通道蛋白表達后,阿霉素激活氯電流減小,CNE-2Z細胞對阿霉素的攝取減弱。