2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩54頁未讀, 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、仔豬腹瀉是造成全球范圍內(nèi)養(yǎng)豬業(yè)損失的重要原因之一,導(dǎo)致該病發(fā)生的主要病原微生物是產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌(Enterotoxigenic Escherichia coli, ETEC),其毒力因子主要包括粘附素和腸毒素。粘附素又稱為定居因子,是致病性大腸桿菌在腸道內(nèi)定居繁殖的首要條件,而腸毒素是產(chǎn)毒素大腸桿菌生長(zhǎng)繁殖過程中釋放的外毒素,能導(dǎo)致水和電解質(zhì)流向腸腔,造成機(jī)體腹瀉,ETEC腸毒素分為耐熱性腸毒素(heat-stable entero

2、xin,ST)和不耐熱性腸毒素(heat-labile enteroxin,LT)兩類。本研究選取了表達(dá)K88ac菌毛,并能分泌LT和ST2腸毒素的的大腸桿菌K88ac+ ETEC(C83902)為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,對(duì)其進(jìn)行了LT毒力基因的點(diǎn)突變以及ST2毒力基因的敲除,成功構(gòu)建了減毒ETEC,并在小鼠體內(nèi)進(jìn)行了初步應(yīng)用,取得較好的效果,主要過程如下。
  利用Red同源重組無痕敲除技術(shù)對(duì)K88ac+產(chǎn)腸毒素大腸桿菌野生株的LT基因進(jìn)行點(diǎn)

3、突變。根據(jù)已發(fā)表的LT基因序列設(shè)計(jì)特異性引物,利用Red同源重組的方法對(duì)LT的A亞單位基因進(jìn)行無痕點(diǎn)突變,將A亞單位第63位編碼Ser的密碼子(TCT)突變?yōu)榫幋aLys的密碼子(AAA),獲得突變菌株K88ac+ ETEC LT(S63K)。再利用Red同源重組敲除技術(shù),將K88ac+ ETEC LT(S63K)菌株的ST2基因敲除,替代為兩端攜帶dif位點(diǎn)的Gm抗性基因,利用細(xì)菌自身Xer酶切除Gm抗性基因,測(cè)序鑒定正確后,將其命名為

4、K88ac+ ETECLT(S63K)ΔST2。通過進(jìn)行兔體回腸結(jié)扎實(shí)驗(yàn)對(duì)K88ac+ ETEC LT(S63K)ΔST2的腸毒素進(jìn)行檢測(cè),并設(shè)立K88ac+ ETEC(C83902)、DH5α以及CAYE對(duì)照組,結(jié)果顯示注射K88ac+ETEC LT(S63K)ΔST2、DH5α無菌培養(yǎng)上清以及CAYE培養(yǎng)基的腸段積液體積與腸段長(zhǎng)度比值均小于等于0.9,而注射K88ac+ETEC(C83902)無菌培養(yǎng)上清的腸段積液體積與腸段長(zhǎng)度比值

5、為1.27,表明K88ac+ ETEC LT(S63K)ΔST2的確是一株腸毒素減毒的大腸桿菌。
  將8周齡大小的清潔級(jí)Balb/c小鼠頸椎脫臼處死后,采集小鼠的回腸,切割成大小5mm長(zhǎng)的腸段,剪開腸管,無菌的PBS中洗滌3遍后,浸泡到K88ac+ ETEC(C83902)、K88ac+ETEC LT(S63K)ΔST2和DH5α菌液及無菌PBS中,37℃孵育1h,刮取回腸黏膜,涂布載玻片,美蘭染色后顯微鏡下觀察細(xì)菌,結(jié)果K88

6、ac+ ETEC(C83902)、K88ac+ ETECLT(S63K)ΔST2菌液浸泡的腸黏膜刮取液中可觀察到菌體,而DH5α菌液和PBS液浸泡的腸黏膜刮取液中無可見的菌體;將109 cfu的K88ac+ ETEC LT(S63K)ΔST2給小鼠灌胃,同時(shí)設(shè)立產(chǎn)腸毒素大腸桿菌K88ac+ ETEC(C83902)對(duì)照組,結(jié)果致弱K88ac+大腸桿菌接種的小鼠無任何臨床癥狀,K88ac+ ETEC(C83902)接種小鼠后,小鼠出現(xiàn)顫抖

7、、食欲廢絕、死亡等癥狀,剖檢后腸道內(nèi)有大量黃色積液,腸壁發(fā)生粘連。表明在K88ac菌毛的作用下,大腸桿菌能粘附到小鼠的回腸黏膜表面,分泌腸毒素的K88ac+ ETEC可使Balb/c小鼠發(fā)病死亡,而致弱的K88ac+ ETEC LT(S63K)ΔST2由于腸毒素基因點(diǎn)突變及缺失,即使大劑量的灌胃,對(duì)小鼠也無明顯影響。
  將K88ac+ ETEC LT(S63K)ΔST2灌胃Balb/c小鼠,分別于隨后的24h、48h、72h、9

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論