Fcγ受體介導(dǎo)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中性粒細(xì)胞凋亡延遲的作用.pdf

1、目的：通過研究類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）患者關(guān)節(jié)滑液、外周血中性粒細(xì)胞（PMN）凋亡狀態(tài)，觀察PMN表面Fcγ受體在凋亡過程中的變化，闡明PMN表面FcγR在RA患者PMN延遲凋亡中的作用。
　　方法：本研究納入RA患者膝關(guān)節(jié)滑液22例、外周血22例，健康志愿者外周血11例。采用密度梯度離心法、冰純水裂紅法，分離、純化PMN。采用流式細(xì)胞鑒定PMN細(xì)胞純度，采用臺(tái)盼藍(lán)檢測(cè)細(xì)胞活力。分離出的PMN采用BD FITC AnnexinV-Ap

2、optosis Detection Kit I染色后，使用流式細(xì)胞檢測(cè)PMN在4h、8h、12h、24h AnnexinV的陽(yáng)性率，以此說(shuō)明PMN的凋亡情況。采用50％ RA膝關(guān)節(jié)滑液刺激健康志愿者外周血PMN后，流式細(xì)胞檢測(cè)4h、8h、12h、24h AnnexinV的陽(yáng)性率。采用CD16-APC、CD16b-PE、CD32-FITC、CD64-BV510分別標(biāo)記細(xì)胞表面FcγRIII、FcγRIIIb、FcγRII、FcγRI，流式

3、細(xì)胞檢測(cè)RA患者膝關(guān)節(jié)滑液、外周血及健康志愿者外周血PMN表面FcγR（FcγRIII、FcγRIIIb、FcγRII、FcγRI）的表達(dá)。50%RA關(guān)節(jié)滑液與健康志愿者外周血、RA患者外周血來(lái)源的PMN共孵育5h，檢測(cè)PMN孵育前后FcγR表達(dá)差異。人口特征：性別比較采用頻數(shù)分布四格表-fisher確切概率法，年齡病程采用Mann-Whitney U非參數(shù)秩和檢驗(yàn)；AnnexinV陽(yáng)性率采用Two way-ANOVA，組間采用Bonf

4、erroni分析；FcγR表達(dá)采用One way-ANOVA，組間采用Bonferroni分析。
　　結(jié)果：①RA患者關(guān)節(jié)滑液組、RA患者外周血組及健康者外周血組在年齡和性別構(gòu)成比上無(wú)明顯差異，RA滑液組及RA外周血組在病程和疾病活動(dòng)度上無(wú)明顯差異。②與健康志愿者外周血相比，RA患者外周血中性粒細(xì)胞凋亡延遲；RA患者關(guān)節(jié)滑液與外周血中中性粒細(xì)胞凋亡無(wú)差異。③24h（4h、8h、12h和24h）凋亡率：健康志愿者外周血PMN為49.

5、2±8.5%、59.3±9.1%、66.5±8.3%和79.0±6.3%；RA患者外周血PMN為38.3±12.3%、44.0±4.5%、38.4±8.0%和51.4±8.7%；RA患者膝關(guān)節(jié)滑液PMN為36.9±7.7%、41.9±8.5%、42.9±8.7%和44.7±9.1%。④ RA滑液能顯著抑制健康者外周血PMN凋亡(P<0.01)；RA滑液處理后，健康者外周血PMN凋亡率為51.7±7.1%（4 h）、53.1±6.8%（8

6、 h）、58.7±8.9%（12 h）和65.9±6.7%（24 h）。⑤健康者及RA患者外周血中性粒細(xì)胞表面FcγRIIIb表達(dá)陽(yáng)性且僅為一群，F(xiàn)cγRs表達(dá)無(wú)差異(P>0.05)；與外周血相比，RA關(guān)節(jié)滑液中中性粒細(xì)胞FcγRI表達(dá)顯著增高(P<0.05)。FcγRIIIb表達(dá)為FcγRIIIbhigh、FcγRIIIblow兩群，且FcγRIIIbhigh比例顯著低于FcγRIIIblow(P<0.05)。⑥RA滑液能影響健康者、