CD157在結(jié)核患者體內(nèi)的表達(dá)水平、作用及其機(jī)制的初步探討.pdf

1、目的：
　　1.檢測(cè)健康人群、結(jié)核潛伏感染者、肺炎患者、肺結(jié)核患者外周血單個(gè)核細(xì)胞和血漿中CD157水平，了解CD157在這些人群體內(nèi)的表達(dá)情況。
　　2.利用體外細(xì)胞模型（結(jié)核分枝桿菌H37Ra感染人外周血的單核巨噬細(xì)胞系THP-1、外周血單個(gè)核細(xì)胞）探討CD157表達(dá)增高的作用及其相關(guān)機(jī)制。
　　方法：
　　1.利用qPCR檢測(cè)各組人群外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）中CD157 mRNA的表達(dá)水平；利用ELIS

2、A檢測(cè)血漿和配對(duì)胸水上清中游離CD157的蛋白水平；流式細(xì)胞術(shù)分析CD157在不同細(xì)胞表面的表達(dá)情況。
　　2.收集結(jié)核性胸膜炎和非結(jié)核性胸膜炎患者胸腔積液，用ELISA檢測(cè)上清中游離CD157蛋白水平。
　　3.對(duì)部分活動(dòng)性肺結(jié)核患者進(jìn)行隨訪(fǎng)，檢測(cè)其治療前及治療后3、6、12月外周血PBMC中CD157的mRNA水平，以及血漿中游離CD157濃度的變化情況。
　　4.利用結(jié)核分枝桿菌（結(jié)核桿菌）H37Ra感染THP-

3、1和PBMC細(xì)胞，檢測(cè)細(xì)胞中CD157的表達(dá)情況。
　　5.檢測(cè)結(jié)核性胸膜炎患者胸水中CD157和γ干擾素（IFN-γ）表達(dá)情況，比較兩者相關(guān)性；用結(jié)核性胸膜炎患者和非結(jié)核性胸膜炎患者胸水培養(yǎng)THP-1細(xì)胞，加入IFN-γ或中和IFN-γ抗體，檢測(cè)其對(duì)CD157表達(dá)的影響。
　　6.用CD157和結(jié)核桿菌作用于THP-1細(xì)胞，觀(guān)察CD157對(duì)結(jié)核桿菌感染的巨噬細(xì)胞分泌趨化因子的能力及其對(duì)細(xì)胞遷移的影響。
　　結(jié)果：

4、r>　　1. CD157在肺結(jié)核患者體內(nèi)表達(dá)升高：在PBMC中，肺結(jié)核患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中CD157mRNA的表達(dá)水平顯著高于健康對(duì)照組、結(jié)核潛伏感染組和肺炎患者組（P<0.05）；流式結(jié)果顯示，CD157主要表達(dá)于單核細(xì)胞以及中性粒細(xì)胞表面，T細(xì)胞表面幾乎不表達(dá)，但在肺結(jié)核患者體內(nèi)表達(dá)CD157的單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的比例與健康對(duì)照組相比并沒(méi)有顯著性差異；在血漿中，肺結(jié)核患者血漿游離CD157濃度顯著高于結(jié)核潛伏感染組、肺炎對(duì)照組和

5、健康對(duì)照組（P<0.05）；而CD157mRNA在痰涂片陽(yáng)性和痰涂片陰性的活動(dòng)性肺結(jié)核患者中的表達(dá)水平并沒(méi)有顯著性差異。
　　2.CD157的表達(dá)水平隨著抗結(jié)核治療降低：檢測(cè)治療后3、6、12月活動(dòng)性肺結(jié)核患者的外周血中CD157的mRNA水平，以及血漿中游離CD157濃度，結(jié)果顯示，肺結(jié)核患者治療后6個(gè)月和12個(gè)月外周血中CD157 mRNA表達(dá)水平和血漿中CD157濃度顯著降低，相比治療前差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。<

6、br>　　3. CD157在結(jié)核性胸膜炎患者胸水中表達(dá)增高：CD157mRNA和游離CD157在結(jié)核性胸膜炎患者胸水中的表達(dá)水平顯著高于其在外周血中的表達(dá)水平。結(jié)核性胸膜炎患者胸水的游離CD157的含量顯著高于非結(jié)核性胸膜炎患者（P<0.05）。
　　4. CD157可誘導(dǎo)結(jié)核桿菌感染的巨噬細(xì)胞分泌CCL2，進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞遷移：利用CD157和結(jié)核桿菌共作用于THP-1細(xì)胞，結(jié)果顯示THP-1細(xì)胞中CCL2的表達(dá)顯著高于單獨(dú)的CD1

7、57或者結(jié)核桿菌作用的細(xì)胞（P<0.05）；進(jìn)一步的細(xì)胞遷移（Transwell）實(shí)驗(yàn)表明，CD157和結(jié)核桿菌共作用的THP-1細(xì)胞上清可以顯著提高細(xì)胞的遷移率，而在細(xì)胞上清中加入抗CCL2的中和抗體，這種遷移作用得到了顯著的抑制，表明CD157是通過(guò)促進(jìn)結(jié)核桿菌感染的巨噬細(xì)胞中CCL2的表達(dá)來(lái)調(diào)節(jié)細(xì)胞的遷移。
　　5.結(jié)核桿菌通過(guò)上調(diào)IFN-γ誘導(dǎo)CD157的表達(dá)：結(jié)核桿菌H37Ra感染THP-1和PBMC細(xì)胞的CD157mR

8、NA或細(xì)胞培養(yǎng)上清中游離CD157表達(dá)量并不增高，與對(duì)照相比，差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。利用結(jié)核性胸膜炎患者和非結(jié)核性胸膜炎患者胸水作用于THP-1細(xì)胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)結(jié)核性胸膜炎患者胸水作用的THP-1細(xì)胞中，CD157mRNA的相對(duì)表達(dá)水平以及游離CD157的濃度都顯著高于非結(jié)核性胸膜炎患者胸水作用的細(xì)胞（P<0.05）。進(jìn)一步，我們發(fā)現(xiàn)肺結(jié)核患者中IFN-γ和CD157的表達(dá)成正相關(guān)。因此我們利用功能性IFN-γ或者IFN-γ