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文檔簡介
1、胃癌細胞的侵襲轉移是導致胃癌患者預后極差的主要原因,積極開展對腫瘤浸潤轉移的分子機制研究具有重要的現(xiàn)實意義。目前研究證實腫瘤細胞在增殖、轉移過程中受到腫瘤微環(huán)境的影響,其侵襲力顯著增強,即轉移中的腫瘤“分子進化”過程。腫瘤微環(huán)境是由纖維細胞、滲透性免疫細胞、血液與淋巴管系統(tǒng)、細胞外基質共同構成,其中常見的細胞因子有白介素1、白介素8、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)等。TNF-α是作為微環(huán)境中炎癥因子的典型代表,其作用受到日益關注。近年來
2、在卵巢癌、人類黑色素瘤等腫瘤細胞上被證實具有促腫瘤浸潤的作用,但其促進腫瘤細胞侵襲的分子機制還不十分清楚。本實驗采用體外培養(yǎng)人胃癌細胞株SGC-7901,構建侵襲小室,并選擇核轉錄因子(NF-kB)和蛋白水解酶之一的尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)做為檢測指標,探討TNF-α促進胃癌細胞侵襲的相關機制。 目的:探討腫瘤壞死因子(TNF-α)誘導胃癌細胞侵襲力的相關機制。 方法:體外培養(yǎng)人胃癌細胞株SGC-7901,采用免
3、疫組化方法檢測其在TNF-α不同濃度、時間誘導下的NF-kB活性、uPA蛋白表達強度;采用噻唑藍(MTT)比色法檢測SGC-7901細胞在不同濃度的TNF-α、PDTC(吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽,NF-kB特異性抑制劑)孵育下的細胞增殖情況;構建侵襲小室,檢測不同濃度TNF-α對SGC-790l細胞侵襲力影響,并用PDTC預先處理細胞后,檢測其對細胞侵襲力的改變。 結果:單因變量方差分析表明:影響SGC-7901 NF-kB p6
4、5、uPA表達的兩因素:TNF-α誘導“不同時間”和“不同濃度”無交互效應(修正模型SS=處理組間SS+配伍組間SS),隨著TNF-α濃度的增加和時間延長,SGC-7901細胞NF-kB活性明顯增強,90min為高峰;TNF-a明顯上調SGC-7901細胞中的uPA蛋白表達水平;一定范圍濃度的TNF-α、PDTC對SGC-7901細胞增殖無明顯影響;隨著TNF-α濃度增加SGC-7901細胞侵襲數(shù)也隨之增加,具有明顯濃度依賴性(TNF-
5、α 5、10、20ng/ml vs 0ng/ml:84.33±3.786、108.33±6.110、121.330±4.163 vs 63.330±4.933,F(xiàn)=126.282),PDTC明顯抑制TNF-α誘導的SGC-7901細胞侵襲力(42.330±4.041 vs 63.330±4.933,F=126.282)。 結論:TNF-α能夠增強胃癌細胞的侵襲力,其增強的侵襲力可能是通過NF-kB信號轉導路徑,激活uPA等蛋白水
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