2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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1、目的 采用Taqman-MGB探針技術(shù),建立熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(FQ-RT-PCR)檢測(cè)DD3mRNA的方法,并對(duì)外周血DD3mRNA定量檢測(cè)在前列腺癌診斷和治療監(jiān)測(cè)中臨床應(yīng)用進(jìn)行評(píng)價(jià)。 方法 1.根據(jù)Genebank的DD3mRNA序列,在DD3基因的外顯子1和3之間設(shè)計(jì)一對(duì)引物和一條Taqman-MGB探針,優(yōu)化反應(yīng)體系,建立DD3mRNA的FQ-RT-PCR方法。 2.用pBluescrip

2、tIISK載體與普通PCR擴(kuò)增所得的DD3cDNA片段進(jìn)行連接,制備重組質(zhì)粒進(jìn)而轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞DH5α并進(jìn)行克隆構(gòu)建重組質(zhì)粒作為標(biāo)準(zhǔn)品。 3.對(duì)本方法進(jìn)行方法學(xué)評(píng)價(jià),包括探針穩(wěn)定性、靈敏度、特異度和精密度等。 4.用熒光定量RT-PCR方法對(duì)35例未治療前列腺癌、58例內(nèi)分泌治療后前列腺癌、59例良性前列腺增生患者和10例健康男性志愿者外周血DD3mRNA含量進(jìn)行定量檢測(cè),并對(duì)DD3mRNA診斷及療效監(jiān)測(cè)價(jià)值進(jìn)行評(píng)價(jià)。

3、 結(jié)果 1.成功建立了熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)DD3mRNA的方法,本方法檢測(cè)靈敏度為6拷貝/反應(yīng),線性范圍為6~6×108拷貝,Ct值與拷貝數(shù)之間具有良好的線性關(guān)系(R2=0.994),批內(nèi)、批間變異系數(shù)分別為1.25-2.06%和2.32-3.59%。擴(kuò)增產(chǎn)物克隆和測(cè)序分析顯示本擴(kuò)增片段為DD3序列的特異性片段。 2.未治療前列腺癌組外周血DD3mRNA含量明顯高于治療后前列腺癌組、前列腺增生組和健康男性

4、志愿者組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。前列腺增生組和健康男性志愿者組外周血DD3mRNA含量間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.432)。未治療前列腺癌患者隨著臨床分期增加,外周血DD3mRNA含量也增高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。 3.當(dāng)臨.界值為846copies/mi時(shí),DD3mRNA曲線下面積為0.822(95%.CI:0.725.0.919),靈敏度、特異度分別為74.3%、89.8%。4.外周血DD3mRN

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