線(xiàn)粒體腦肌病和肌病患者病理及基因突變研究.pdf

1、目的：①了解線(xiàn)粒體腦肌病的臨床表現(xiàn)及輔助檢查手段，加深對(duì)線(xiàn)粒體腦肌病各個(gè)亞型的認(rèn)識(shí)；②探討線(xiàn)粒體腦肌病及肌病患者骨骼肌的組織病理特點(diǎn)及mtDNA基因突變情況，為疾病的診斷提供依據(jù)；③了解基因型與表型的關(guān)系，從而預(yù)測(cè)擁有某種突變基因的患者的預(yù)后及可能發(fā)展為某種綜合癥的風(fēng)險(xiǎn)；④探討線(xiàn)粒體腦肌病的遺傳特點(diǎn)，為患者的家系進(jìn)行基因的篩查，以便于發(fā)現(xiàn)無(wú)癥狀的突變攜帶者。
　　 方法：通過(guò)臨床表現(xiàn)及輔助檢查資料，總結(jié)8例線(xiàn)粒體肌病及腦肌病患者

2、的臨床表現(xiàn)。⑴取其肌肉活檢標(biāo)本用異戊烷和液氮速凍后切片，常規(guī)和酶組化染色，光鏡下觀(guān)察染色后骨骼肌組織的病理特點(diǎn)。⑵利用堿變性法提取肌肉組織和（或）血液的mtDNA。⑶選取四個(gè)較常見(jiàn)的突變位點(diǎn)（A3243G、A8344G、T8993G和T8993C）進(jìn)行突變的檢測(cè)。針對(duì)A3243G、A8344G、T8993G和T8993C突變分別選取特定的引物和限制性?xún)?nèi)切酶，應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制片段長(zhǎng)度多態(tài)性（PCR-RFLP）進(jìn)行特異性擴(kuò)增，然后用

3、特定的限制性?xún)?nèi)切酶對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行酶切，用瓊脂糖凝膠電泳鑒定DNA片段長(zhǎng)度的方法，檢測(cè)8例線(xiàn)粒體腦肌病和肌病患者（2例MELAS和6例線(xiàn)粒體肌?。┘?0例非線(xiàn)粒體疾病患者（對(duì)照）骨骼肌細(xì)胞中mtDNA是否發(fā)生A3243G、A8344G、T8993G和T8993C突變。⑷對(duì)其中一例線(xiàn)粒體腦肌病伴高乳酸血癥和卒中樣發(fā)作（MELAS）患者及其部分母系家屬的血液標(biāo)本進(jìn)行A3243G突變檢測(cè)，同時(shí)計(jì)算突變比例。
　　 結(jié)果：①8例線(xiàn)粒體腦肌

4、病和肌病患者的肌肉病理均發(fā)現(xiàn)破碎紅纖維（RRF），且RRF的出現(xiàn)頻率均大于4％。②1例MELAS（例1）和1例線(xiàn)粒體肌病患者肌肉存在A(yíng)3243G點(diǎn)突變；1例線(xiàn)粒體肌病患者存在A(yíng)8344G點(diǎn)突變；患者均未發(fā)現(xiàn)T8993G和T8993C突變。對(duì)照組未發(fā)現(xiàn)以上4個(gè)位點(diǎn)的突變。③例1及其一兄一弟的血液中均檢測(cè)出A3243G突變，而其母血中未發(fā)現(xiàn)此突變。例1肌肉中及血液中的A3243G的突變比例分別為：64.35％和38.09％；例1、其兄及其弟