早產(chǎn)胎盤(pán)miRNA表達(dá)譜構(gòu)建及miR-182-5p在早產(chǎn)中作用的探討.pdf

1、早產(chǎn)(Preterm Birth，PTB)定義為孕期小于37周或從末次月經(jīng)第一天開(kāi)始計(jì)算少于259天分娩。早產(chǎn)在我國(guó)的發(fā)生率約為8％，并且有逐年上升的趨勢(shì)，75％的圍產(chǎn)兒死亡和50％的異常與早產(chǎn)有關(guān)，是圍產(chǎn)兒發(fā)病和死亡的首要原因。早產(chǎn)的發(fā)生機(jī)制尚不完全清楚，目前認(rèn)為，早產(chǎn)是多種因素相互作用所致的一種綜合征，與遺傳、感染、孕酮水平、多胎妊娠、宮頸長(zhǎng)度、胎盤(pán)異常、年齡、營(yíng)養(yǎng)狀況、凝血因素等有關(guān)。
　　近年來(lái)，研究發(fā)現(xiàn)微小RNA(mic

2、roRNA，miRNA)水平及基因3'非翻譯區(qū)（3'-UTR）上miRNA作用靶點(diǎn)序列多態(tài)與早產(chǎn)、先兆子癇、流產(chǎn)以及胎兒畸形等不良妊娠結(jié)局有關(guān)。本研究旨在構(gòu)建早產(chǎn)胎盤(pán)差異表達(dá)的miRNA圖譜，篩選早產(chǎn)相關(guān)的miRNA，并探討其在早產(chǎn)中的作用。
　　方法:
　　2013年2月-2013年10月期間分娩的早產(chǎn)兒16例為病例組，同期健康足月產(chǎn)兒18例為對(duì)照組，取胎盤(pán)組織。通過(guò)非標(biāo)記miRNA芯片技術(shù)構(gòu)建早產(chǎn)胎盤(pán)組織miRNA表達(dá)譜

3、，采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)進(jìn)行驗(yàn)證。構(gòu)建鋅指E-box結(jié)合同源框2(Zinc finger E-box binding homeobox2，ZEB2)和人凝血因子(Ⅻ)A1多肽（Factor(Ⅻ)A，F(xiàn)13A1）的psiCHECK2野生型和突變型的載體，通過(guò)雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)、原位雜交等方法探討miR-182-5p與ZEB2和F13A1基因的互作關(guān)系。
　　結(jié)果:
　　1.對(duì)照組胎盤(pán)和早產(chǎn)胎盤(pán)中有11

4、38種miRNAs在胎盤(pán)中表達(dá)，其中miR-4251、miR-517c-3p和miR-23b-3p等miRNAs在胎盤(pán)中表達(dá)最高，miR-1292-3p、miR-4632-5p和miR-5787等miRNAs表達(dá)最低。miRNA芯片結(jié)果顯示44種miRNAs在早產(chǎn)胎盤(pán)組織和對(duì)照組胎盤(pán)組織中差異表達(dá)，其中上調(diào)表達(dá)的33個(gè)，下調(diào)表達(dá)的11個(gè)，miR-493-3p是下調(diào)表達(dá)倍數(shù)最多的miRNA，下調(diào)倍數(shù)為2.77倍，miR-1322為上調(diào)表達(dá)

5、最多的miRNA，上調(diào)倍數(shù)為9.81。RT-PCR驗(yàn)證結(jié)果與芯片結(jié)果一致。
　　2.實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示miR-182-5p在早產(chǎn)胎盤(pán)組織中表達(dá)水平顯著增加，采用原位雜交結(jié)果顯示miR-182-5p在胎盤(pán)組織細(xì)胞質(zhì)中廣泛表達(dá)。
　　3.采用在線(xiàn)軟件預(yù)測(cè)miR-182-5p的靶基因?yàn)閆EB2和F13A1。雙熒光素酶活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在HTR-8/SVneo細(xì)胞中miR-182-5p直接作用于ZEB2和F13A1基因，并且起

6、抑制作用。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)，與足月產(chǎn)胎盤(pán)相比，早產(chǎn)胎盤(pán)組織的ZEB2和F13A1的mRNA未見(jiàn)差異表達(dá)。
　　結(jié)論:
　　1.早產(chǎn)胎盤(pán)組織中存在差異表達(dá)的miRNAs，這些差異表達(dá)的miRNAs在早產(chǎn)中的功能還需要進(jìn)一步的研究。
　　2.miR-182-5p在早產(chǎn)胎盤(pán)組織中表達(dá)上調(diào)，在離體細(xì)胞中miR-182-5p對(duì)ZEB2和F13A1基因起抑制作用，但是在在體組織中，在miR-182-5p增高的早產(chǎn)胎盤(pán)