人臍血有核細(xì)胞和人胎盤來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞分離方法的比較研究.pdf_第1頁(yè)
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1、第一部分:對(duì)三種臍血分離的方法進(jìn)行較為系統(tǒng)的比較研究,以求找到一種性價(jià)比最高的臍帶血CD34+干/祖細(xì)胞分離方法。無(wú)菌條件下取正常足月剖腹產(chǎn)嬰兒臍帶血,經(jīng)肝素抗凝,用三種不同方法:6%羥乙基淀粉法、NH4Cl溶解法(紅細(xì)胞裂解液法)、1.077g/ml淋巴細(xì)胞液(Ficoll)密度梯度離心法,分離臍帶血有核細(xì)胞,用流式細(xì)胞儀檢測(cè)其表面抗原,以半固體甲基纖維素培養(yǎng)基進(jìn)行集落培養(yǎng)。三種方法都能從臍血中分離出有核細(xì)胞,回收率依次為:78.4±

2、2.71%,80.97±4.55%和21.53±3.61%,其中6%羥乙基淀粉法和NH4Cl溶解法(紅細(xì)胞裂解液法)的有核細(xì)胞回收率較為相近,而淋巴細(xì)胞液(Ficoll)密度梯度離心法分離出的細(xì)胞數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足臨床需要;經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD34+細(xì)胞結(jié)果顯示,淋巴細(xì)胞液(Ficoll)密度梯度離心法分離出的有核細(xì)胞中CD34+細(xì)胞總量上低于其他兩種方法;經(jīng)造血干細(xì)胞集落培養(yǎng)發(fā)現(xiàn),三種方法分離出的有核細(xì)胞都能生長(zhǎng)成為成熟的造血細(xì)胞集落。

3、三種方法得到了不同的細(xì)胞回收率。NH4CI溶解法得到的細(xì)胞回收率最高,且操作簡(jiǎn)單成本低廉,滿足臍血移植造血干細(xì)胞的需要。從成本角度考慮,以紅細(xì)胞裂解液法成本最為低廉且操作最為簡(jiǎn)便,淋巴細(xì)胞液(Ficoll)密度梯度離心法成本最為昂貴且操作復(fù)雜要求最高。 第二部分:主要比較兩種不同分離方法分離和培養(yǎng)人胎盤來(lái)源MSC并研究它們的生物學(xué)特征。人胎盤來(lái)源MSC用密度梯度分離方法或直接消化法分離并用MSC專用培養(yǎng)基培養(yǎng)。比較兩種方法得到的

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