三種豬小DNA病毒在豬不同組織中的檢測(cè)研究.pdf

1、近年來(lái)，隨著分子生物學(xué)技術(shù)在病毒學(xué)研究中的廣泛應(yīng)用，多種新的病原在豬群中被發(fā)現(xiàn)，尤其是小DNA病毒直接或間接地給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)了巨大的危害。豬圓環(huán)病毒2型(Porcine circovirus type2，PCV2)、豬細(xì)環(huán)病毒(Porcine torque sus teno virus，TTSuV)以及豬博卡病毒(Porcine bocavirus，PBoV)都屬于小DNA病毒，其基因組序列全長(zhǎng)均在1.7kb-5.9kb之間。目前對(duì)于TT

2、SuV和PBoV的直接致病性和復(fù)制機(jī)理尚不清楚。許多研究表明，在患有PMWS的病豬中，TTSuV和PBoV的檢出率明顯高于正常豬群，可能這三種小DNA病毒之間存在著某種協(xié)同作用。本研究分別對(duì)疑似PCV2感染病豬的不同組織臟器進(jìn)行PCV2、TTSuV和PBoV的PCR檢測(cè)，以期為后續(xù)研究這三種小DNA病毒在引發(fā)疾病方面是否存在協(xié)同作用奠定基礎(chǔ)，同時(shí)也為研究TTSuV和PBoV的發(fā)病機(jī)制提供一定的依據(jù)。
　　本研究對(duì)江西省11個(gè)縣市采

3、集到的疑似豬圓環(huán)病毒2型感染的不同階段同一病豬的肺臟、脾臟、小腸、腹股溝淋巴結(jié)和血液樣品169份分別進(jìn)行PCV2、TTSuV和PBoV的PCR檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果顯示，PCV2、TTSuV和PBoV在江西地區(qū)豬群普遍感染，且不同地區(qū)的感染率不一。PCV2陽(yáng)性病料數(shù)為165份，陽(yáng)性率為97.63％; PBoV陽(yáng)性病料數(shù)為77份，陽(yáng)性率為45.56％; TTSuV陽(yáng)性病料數(shù)為85份，陽(yáng)性率為50.3％，其中TTSuV1的陽(yáng)性率為21.3％(36/

4、169)，TTSuV2的陽(yáng)性率為40.83％(69/169)，TTSuV1和TTSuV2的共感染率為11.83％(20/169)。PCV2和PBoV共感染樣品數(shù)為77份，感染率為45.56％，PCV2和TTSuV共感染樣品數(shù)為83份，感染率為49.11％，PBoV和TTSuV共感染樣品數(shù)與PCV2、PBoV和TTSuV三者共同感染樣品數(shù)均為43份，感染率為25.44％。
　　為了解三種小DNA病毒在不同生長(zhǎng)階段的感染情況，本研究對(duì)

5、169頭各生長(zhǎng)階段豬的組織樣品進(jìn)行三種小DNA病毒的檢測(cè)，結(jié)果顯示，PCV2在不同生長(zhǎng)階段的檢出率均在95％以上，其中育肥豬檢出率達(dá)到了100％; PBoV在保育豬中的檢出率最高，其次是哺乳豬和育肥豬;TTSuV在育肥豬的檢出率最高，檢測(cè)率會(huì)隨著日齡的增長(zhǎng)而升高。
　　為了解三種小DNA病毒在不同組織器官中的感染情況，本研究對(duì)169頭豬的不同組織器官分別進(jìn)行三種小DNA病毒的檢測(cè)，結(jié)果顯示，在165份PCV2陽(yáng)性樣品中，腹股溝淋巴

6、結(jié)中的陽(yáng)性樣品數(shù)最多，為146份，陽(yáng)性率達(dá)到了88.48％，陽(yáng)性率最低的為小腸(112/165，67.88％);在77份PBoV陽(yáng)性樣品中，陽(yáng)性率最高的為脾臟(46/77，59.74％)和小腸(44/77，57.14％)最低的為血液(36/77，46.75％);不同組織器官中TTSuV、TTSuV1、TTSuV2以及TTSuV1和TTSuV2共感染的檢出率呈現(xiàn)出相同的趨勢(shì)，血液中的檢出率顯著高于其他組織器官。
　　參考GenBan

7、k公布的序列設(shè)計(jì)一對(duì)PBoV NP1基因擴(kuò)增引物，通過(guò)T-A克隆、序列測(cè)定與拼接獲得了3株P(guān)BoVNP1基因序列，長(zhǎng)度均為657 bp。系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)表明，試驗(yàn)獲得的三株豬博卡病毒NP1基因在同一分支上，與中國(guó)湖北SX株(HQ223038)和上海H18株(HQ291308)親緣關(guān)系近，與引入的人博卡病毒、猩猩博卡病毒、犬細(xì)小病毒、牛細(xì)小病毒以及豬細(xì)小病毒屬于不同的分支，親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。所引入的豬博卡病毒毒株形成三個(gè)分支，不同分支之間的親緣關(guān)系