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1、大麥黃矮病毒(Barleyyellowdwarfviruses,BYDVs)是引起我國麥類病毒病的主要病毒之一,可造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。由于中國小麥種植區(qū)域的生態(tài)地理環(huán)境有很大差異,可能造成BYDVs含有較為豐富的變異類型。本試驗(yàn)以我國不同地區(qū)的大麥黃矮病株標(biāo)樣為材料,對(duì)其進(jìn)行分子鑒定,明確不同地區(qū)分離物的病毒種類(株系)、分子變異和進(jìn)化關(guān)系。 2004年和2005年共采集BYDVs標(biāo)樣279個(gè),提取總RNA經(jīng)RT-PCR擴(kuò)增CP基
2、因以及核酸點(diǎn)雜交檢測(cè)我國近兩年的大麥黃矮病發(fā)生情況,標(biāo)樣的70%左右為陽性結(jié)果,其中,BYDV-GAV占據(jù)了陽性樣品的大部分比例,BYDV-PAV、BYDV-GPV分別在特定區(qū)域優(yōu)勢(shì)地發(fā)生,如2005年BYDV-PAV主要集中在陜西渭南和楊陵地區(qū),占當(dāng)?shù)仃栃詷悠返?9.41%,比2004年的7%有明顯的增多。BYDV-GPV,作為中國特有的大麥黃矮病毒株系,在田間的檢測(cè)樣品中比較少,多發(fā)生在山西運(yùn)城,2005年陜西渭南、陜西鳳翔、甘肅甘
3、谷各檢測(cè)到一例。 RT-PCR產(chǎn)物經(jīng)克隆測(cè)序,進(jìn)行多序列比對(duì)分析不同病毒(株系)的分子變異情況。測(cè)序的26個(gè)BYDV-GAV核苷酸序列長度為600bp,序列一致程度高,變異程度非常小。根據(jù)序列構(gòu)建的系統(tǒng)進(jìn)化樹具有許多平行分支,表明BYDV-GAV序列之間沒有明顯的聚類。BYDV-PAV核苷酸序列的分子變異則與BYDV-GAV結(jié)果不同,600個(gè)堿基中有179個(gè)位點(diǎn)發(fā)生變異,尤其表現(xiàn)在3’末端。系統(tǒng)進(jìn)化樹形成四個(gè)組(A-D)。A、B
4、、C三組同屬于PAV-CN分離物,雖從同一進(jìn)化分支而來,但其各自序列相互間差異程度較大,進(jìn)而分別聚類成組。BYDV-GPVCP基因核苷酸序列長度為606bp,測(cè)得序列間同源性為98.7%-99.8%,變異很小。 在測(cè)得的BYDV-PAV序列中,來自甘肅省甘谷的05GG2標(biāo)樣比較特殊,它與PAV-CN核苷酸差異較大,而與國外PAV分離物相似程度較高,根據(jù)已公布的BYDV-PAV分離物全基因組序列設(shè)計(jì)保守引物,擴(kuò)增出05GG2除末端
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