大麥黃矮病毒運(yùn)動(dòng)蛋白與AtVOZ1和AtVOZ2互作并延遲擬南芥開(kāi)花.pdf

1、大麥黃矮病毒（Barelyyellow dwarf viruses，BYDVs）侵染多種禾本科作物，呈現(xiàn)多種發(fā)病癥狀同時(shí)也給世界糧食生產(chǎn)造成嚴(yán)重的損失。其在小麥上的癥狀主要有植物矮化、葉片黃化，除此之外在燕麥上還能造成分蘗和抽穗的減少。而目前對(duì)于這種癥狀的產(chǎn)生原因研究的還不是很清楚。為了更好地控制小麥病毒病發(fā)生，研究該病癥的發(fā)病機(jī)制勢(shì)在必行。大麥黃矮病毒的運(yùn)動(dòng)蛋白(Movement Protein，MP)的主要功能是結(jié)合病毒RNA，增大

2、胞間連絲孔徑并促使其在植物細(xì)胞間運(yùn)輸。但是對(duì)于MP對(duì)植物生理生化方面的影響研究的還是較少。因此，本研究針對(duì)BYDV-GAV MP對(duì)模式植物擬南芥生理生化方面的影響進(jìn)行了研究，主要結(jié)果如下:
　　1.通過(guò)酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)在擬南芥中能夠與MP蛋白互作的是兩個(gè)轉(zhuǎn)錄因子，維管植物鋅指蛋白AtVOZ1和AtVOZ2。利用雙分子熒光互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)(BiFC)，進(jìn)一步驗(yàn)證MP與AtVOZ1和AtVOZ2是能夠相互作用的，且互作的位置是細(xì)胞質(zhì)。根據(jù)

3、MP蛋白的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)域，對(duì)MP片段進(jìn)行缺失突變，構(gòu)建了MP(DH1)、MP(DH2)、MP(DH3)三個(gè)突變體。通過(guò)雙分子熒光互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明只有MP(DH2)不能與AtVOZ1和AtVOZ2互作，而MP(DH2)是缺失了MP的N端1-81aa，即MP的核定位信號(hào)區(qū)域，說(shuō)明MP的N端核定位信號(hào)在互作中是必須的。
　　2.由于AtVOZ1和AtVOZ2是控制擬南芥開(kāi)花通路上的關(guān)鍵基因。我們通過(guò)農(nóng)桿菌浸花轉(zhuǎn)序的方法構(gòu)建MP轉(zhuǎn)基因擬南芥

4、。探究轉(zhuǎn)基因植株是否產(chǎn)生開(kāi)花方面的表型差異。結(jié)果顯示，同時(shí)播種野生型和轉(zhuǎn)基因擬南芥，開(kāi)花時(shí)，轉(zhuǎn)基因擬南芥蓮座葉數(shù)目比野生型顯著增多，同時(shí)轉(zhuǎn)基因擬南芥經(jīng)過(guò)更長(zhǎng)的時(shí)間才開(kāi)始開(kāi)花。MP轉(zhuǎn)基因擬南芥表現(xiàn)晚花表型，也就是MP影響了擬南芥的開(kāi)花表型。
　　3.AtVOZ1和AtVOZ2是光周期通路phyB途徑上的關(guān)鍵基因。為了探究MP轉(zhuǎn)基因植株出現(xiàn)的晚花表型是否與phyB途徑有關(guān)，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR試驗(yàn)，測(cè)定轉(zhuǎn)基因擬南芥及野生型擬南芥ph