木芙蓉葉總黃酮的提取純化及其藥效學(xué)的研究.pdf

1、目的:研究木芙蓉葉總黃酮的提取、純化及含量測定,初步探討木芙蓉葉總黃酮的抑菌活性及不同極性溶劑提取物的體外抗病毒活性。
　　方法:以總黃酮的提取率為指標(biāo),采用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn),對木芙蓉葉總黃酮的提取工藝方法進(jìn)行優(yōu)化,確定其最佳提取條件。采用聚酰胺樹脂對木芙蓉葉總黃酮提取液進(jìn)行純化,以吸光度和比吸附量為指標(biāo),進(jìn)行單因素試驗(yàn)研究,得到了最優(yōu)的純化方法。采用HPLC色譜法檢測木芙蓉葉總黃酮提取物,比較了乙腈-甲醇-四氫呋喃-0.5％

2、冰醋酸(1:1:19.4:78.6)、0.02 mol/L磷酸二氫鉀緩沖液(含1%冰醋酸)-甲醇(73:27)、甲醇與水梯度洗脫、乙腈與0.2%磷酸梯度洗脫效果。運(yùn)用藥敏紙片法和二倍稀釋法,以大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞菌、藤黃微球菌、普通變形菌、糞腸球菌為供試菌種,對木芙蓉葉提取物進(jìn)行抑菌試驗(yàn)。以呼吸道合胞病毒為供試病毒,不同極性溶劑的提取物進(jìn)行體外抗病毒實(shí)驗(yàn)進(jìn)行研究。
　　結(jié)果:木芙蓉葉總黃酮最佳提取條件為:乙醇濃度50

3、%,料液比1:10,提取1.5 h,浸提3次。此工藝所得到的提取物中,總黃酮的提取率為22.81 mg/g。采用聚酰胺樹脂對木芙蓉葉總黃酮提取液進(jìn)行純化,以吸光度和比吸附量為指標(biāo),進(jìn)行單因素試驗(yàn)研究,得到了最優(yōu)的純化方法:上樣濃度2.25 mg/mL,上樣量10 mL/g,乙醇解吸濃度70%,解吸速率2 BV/h,洗脫用量為2.5 BV。用聚酰胺純化后總黃酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)提高了45%,達(dá)到60%。采用HPLC法,以乙腈與0.2%磷酸梯度洗脫

4、效果最好,經(jīng)檢測木芙蓉總黃酮提取物中金絲桃苷含量為純化物總量的9.57%,蘆丁為1.52%。木芙蓉葉提取物對大腸桿菌、藤黃微球菌、糞腸球菌、普通變形桿菌最低抑菌濃度(MIC)均為0.125 mg/mL,對藤黃微球菌、枯草芽孢桿菌(MIC)均為0.25 mg/mL。結(jié)果表明提取物對上述6種抑菌效果均較好。木芙蓉葉總黃酮的水提取物及水煎樣對呼吸道合胞病毒具有一定的抑制作用,水提取物的EC50為1:8.94,TI＞8.94,水煎樣的EC50為

5、1:9.00,TI＞9.00。
　　結(jié)論:通過對提取、純化工藝優(yōu)化得到純度較高的木芙蓉葉總黃酮提取物,采用HPLC法,以乙腈與0.2%磷酸梯度洗脫測定木芙蓉葉提取物中蘆丁、金絲桃苷,靈敏度高,重復(fù)性好,為木芙蓉葉總黃酮檢測提供了依據(jù),并初步制定了木芙蓉葉總黃酮提取物的指紋圖譜。并且其具有較好的抑菌活性,可用于天然抑菌劑的開發(fā),但其體外抗病毒的效果并不顯著。木芙蓉的水提取物及水煎樣有一定的抑制呼吸道合胞病毒的作用,而其他提取物均無體