葛藤總黃酮的提取純化及其抗氧化活性的研究.pdf

1、葛根為常用中藥，具有多種藥理作用，是國家衛(wèi)生部批準(zhǔn)的藥食兩用植物。葛根含有葛根素、大豆?fàn)I、大豆苷元等30多種異黃酮類物質(zhì)，其中葛根素是本屬特有成分和主要有效成分。隨著葛根應(yīng)用的不斷擴(kuò)大，市場需求量大，資源比較緊張。葛藤為野葛的藤莖，其主要成分為異黃酮類化合物，在對(duì)野葛地上藤莖部分進(jìn)行了一系列可行性研究之后發(fā)現(xiàn)，野葛藤中含有大量與葛根相同的異黃酮成分，其中葛根素及大豆苷元含量較豐富。而每年秋冬季節(jié)葛根采挖后藤莖全都廢棄，造成資源極大浪費(fèi)并

2、破壞自然環(huán)境。因此，深入開展野葛藤莖的應(yīng)用研究對(duì)于拓寬葛根藥用資源，保持自然界生態(tài)平衡、保護(hù)環(huán)境和資源再利用有重要意義，對(duì)于制藥和食品工業(yè)也具有深遠(yuǎn)的意義。 本研究以野葛藤為試材，以堿水作溶劑對(duì)葛藤總黃酮的提取工藝進(jìn)行了研究，對(duì)提取液的純化工藝進(jìn)行了優(yōu)化，通過HPLC對(duì)葛藤總黃酮組分進(jìn)行了鑒定，并探討了葛藤總黃酮的體外抗氧化活性。 研究主要內(nèi)容和結(jié)果如下： (1)對(duì)野葛不同部位總黃酮含量進(jìn)行了對(duì)比分析，結(jié)果表明野

3、葛的根部總黃酮含量最高，達(dá)到4.81％，而秋季以后采集的野葛藤也富含總黃酮成分，含量為2.73％；藤莖的采集時(shí)間對(duì)于總黃酮含量影響很大，以秋冬季采集的藤中含量最高。 (2)采用顏色反應(yīng)和薄層色譜法對(duì)葛藤總黃酮組分進(jìn)行了初步定性鑒定，TLC試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)野葛藤莖中含有多種與葛根相同的異黃酮成分，并初步確定含有葛根素和大豆苷元兩種主要異黃酮成分，其Rf分別為0.45和0.83。 (3)葛藤總黃酮堿水浸提法提取工藝的研究。以總黃酮的

4、提取率為指標(biāo)，進(jìn)行了堿水浸提單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)，結(jié)果表明，各因素對(duì)總黃酮提取效果影響的主次順序?yàn)椋禾崛r(shí)間＞浸提溫度＞料液比，提取時(shí)間對(duì)提取率的影響表現(xiàn)為極顯著。最佳浸提工藝條件為：粉碎粒度40目，料液比1：40，浸提溫度65℃，浸提時(shí)間2.0h。 (4)葛藤總黃酮微波—堿水提取法提取工藝的研究。以總黃酮的提取率為指標(biāo)，通過單因素試驗(yàn)確定了各因素的試驗(yàn)范圍，再由響應(yīng)面中心旋轉(zhuǎn)組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)。確定了微波—堿水法提取的最優(yōu)工藝條件：

5、料液比1：22，微波功率728W，微波作用時(shí)間47S。各因素對(duì)總黃酮提取效果影響的主次順序是，微波處理時(shí)間＞微波功率＞料液比； (5)以葛藤總黃酮為考察對(duì)象，對(duì)S-8、AB-8、D-101和NKA-9四種大孔吸附樹脂進(jìn)行了靜態(tài)吸附解吸性能比較，確定AB-8樹脂純化葛藤總黃酮性能最好。以AB．8樹脂為吸附劑，乙醇溶液為洗脫劑，對(duì)葛藤總黃酮的純化工藝進(jìn)行研究，得到最優(yōu)純化工藝條件為：以40g濕樹脂裝柱量計(jì)，總黃酮濃度為1.21mg/

6、mL，流速2.0mL/min，進(jìn)液量150mL；以180mL70％的乙醇在3.0mL/min的流速下洗脫，洗脫液經(jīng)真空干燥后，葛藤總黃酮純度達(dá)到80.25％。 (6)采用高效液相色譜法對(duì)葛藤總黃酮成分進(jìn)行了鑒定，試驗(yàn)確定了液相色譜條件為：色譜柱Hypersil BDS C18，柱溫30℃，檢測波長250nm，進(jìn)樣量20μL，梯度洗脫；0～15min，甲醇：水(25：75)：15～30min，甲醇：水(40：60)：流速1.0mL

7、/min。在此液相條件下，葛藤提取液中的主要組分得到較好地分離。 (7)通過高效液相色譜分析得出葛藤精黃酮中含有葛根素和大豆苷元兩種主要功效成分；通過對(duì)純化前后HPLC圖譜的比較發(fā)現(xiàn)，葛藤提取液經(jīng)純化后，葛根素得到了富集，占總峰面積的比率增加了15.36％，而大豆苷元有些損失，占總峰面積的比率減少了8.25％。 (8)葛藤總黃酮具有較強(qiáng)的·OH清除能力利還原能力。而且經(jīng)過AB-8大孔吸附樹脂純化后，清除效果和還原能力明顯