紫花苜蓿總黃酮的提取、純化及其抗氧化活性研究.pdf

1、本論文共包括三個部分。首先對回流法和超聲波輔助法提取紫花苜?？傸S酮的工藝參數(shù)進行優(yōu)化，確定提取工藝及參數(shù)；然后通過大孔樹脂對紫花苜蓿黃酮粗提物進行初步純化，并用聚酰胺樹脂進一步純化，得到純度較高的紫花苜蓿黃酮組分；最后通過體外自由基產(chǎn)生系統(tǒng)對紫花苜?？傸S酮及不同組分進行抗氧化能力的評價。
　　試驗一紫花苜蓿總黃酮的提取工藝研究
　　試驗一分為兩個部分，第一部分旨在優(yōu)化篩選回流法和超聲波輔助法提取紫花苜?？傸S酮的工藝參數(shù)，確定

2、高效提取紫花苜?？傸S酮的工藝及參數(shù)。首先，利用單因素試驗研究各個提取因素對紫花苜?？傸S酮提取率的影響。根據(jù)單因素試驗結(jié)果，通過正交試驗設(shè)計和響應(yīng)面試驗設(shè)計分別對兩種工藝進行優(yōu)化，并對不同提取工藝下紫花苜?？傸S酮的提取率進行對比。最終確定超聲波輔助提取工藝為紫花苜蓿總黃酮提取工藝，確定以下工藝參數(shù)：液料比51.16：1（mL/g），提取溫度為62.33 ℃，提取時間57.08 min，乙醇濃度52.14％，此條件下，紫花苜?？傸S酮提取率為

3、6.40 mg/g。
　　第二部分分別以清除ABTS自由基和清除DPPH自由基為響應(yīng)值，旨在通過響應(yīng)面試驗設(shè)計優(yōu)化篩選超聲波輔助提取紫花苜蓿抗氧化物質(zhì)的工藝參數(shù)，最終確定以下工藝參數(shù)：
　?、僖郧宄鼳BTS自由基為評價指標的最佳工藝參數(shù)為：液料比47.29：1（mL/g），提取溫度62.73 ℃，提取時間51.62 min，乙醇濃度60%，此條件下，所得提取物對ABTS自由基清除率為87.38%；
　?、谝郧宄鼶PPH

4、自由基為評價指標的最佳工藝參數(shù)為：液料比60.30：1（mL/g），提取溫度54.56 ℃，提取時間45.59 min，乙醇濃度46.67%，此條件下，所得提取物對DPPH自由基清除率為80.72%。
　　試驗二紫花苜?？傸S酮的分離與純化研究
　　本試驗旨在通過研究不同樹脂對紫花苜蓿總黃酮粗提物的純化，得到純度較高的紫花苜蓿黃酮組分。首先對5種不同物理和化學(xué)性能的大孔樹脂（AB-8、D101、HPD-100、HDP-600和

5、NKA-9）進行篩選，以對紫花苜?？傸S酮吸附率和解析率為考察指標，確定適宜紫花苜蓿總黃酮純化的最佳樹脂；然后通過考察樹脂吸附因素（吸附液pH、吸附溫度、上樣體積及濃度）對紫花苜?？傸S酮吸附量的影響，確定最佳吸附條件，最后通過聚酰胺樹脂的進一步純化得到純度較高的黃酮組分。研究結(jié)果表明AB-8大孔樹脂對紫花苜?？傸S酮的吸附量大且易解吸，對紫花苜蓿總黃酮具有較好的吸附和解析性能，適宜用于對紫花苜蓿總黃酮進行純化。確定的最佳吸附條件為：上樣液質(zhì)

6、量濃度為0.6 mg/mL，上樣液pH為4，上樣體積為1～4 BV，吸附溫度為25 oC。粗提液在最佳吸附條件下經(jīng)AB-8大孔樹脂富集后，以4 BV的蒸餾水和不同濃度的乙醇溶液進行梯度洗脫，得到苜?？傸S酮的最高純度組分為33.03%。經(jīng)過AB-8大孔樹脂富集后的紫花苜蓿黃酮類組分再經(jīng)聚酰胺樹脂柱進一步分離純化，用不同濃度的乙醇溶液進行梯度洗脫達到了良好的分離效果，紫花苜蓿黃酮組分的純度最高可達到79.62%。
　　試驗三紫花苜蓿黃

7、酮類化合物抗氧化作用研究
　　本試驗旨在研究紫花苜?？傸S酮及不同極性洗脫部分的體外抗氧化能力。采用分光光度法，以Vc為對照，研究了對1，1-二苯基苦基苯肼（DPPH）自由基、2；2’-連氮-二（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）（ABTS）自由基、羥基自由基的清除率以及對 Fe3+還原能力的測定。結(jié)果表明，紫花苜蓿黃酮類化合物具有較好的去除DPPH自由基的能力，清除率最高可達到88.01%；紫花苜蓿黃酮類化合物對ABTS自由基的清除率