喙果絞股藍總黃酮提取、分析及其抗氧化活性研究.pdf

1、本論文對鎮(zhèn)江地區(qū)7、8、9、10、11月份采集的喙果絞股藍黃酮類成分進行初步研究。首先建立了喙果絞股藍總黃酮含量的測定方法,并結合響應面分析,研究喙果絞股藍的總黃酮提取工藝,并探索了不同月份喙果絞股藍總黃酮的含量變化；建立了RP-HPLC同時測定喙果絞股藍中蘆丁和槲皮素含量的方法,研究了不同月份喙果絞股藍中蘆丁和槲皮素的含量變化；考察了不同月份喙果絞股藍總黃酮的體外抗氧化活性,最后研究對喙果絞股藍中黃酮類化合物結構進行初步鑒定。具體研究

2、結果如下:
　　 (1)建立了喙果絞股藍黃酮類成分含量測定紫外分析方法,建立了蘆丁標準曲線,C=0.1932A-0.0253,相關系數R2為0.9992,線性關系良好,線性范圍在0.0198mg／mL～0.119 mg／mL之間,該方法準確、簡單、重復性好,可用于喙果絞股藍總黃酮含量測定。
　　 (2)研究了喙果絞股藍總黃酮提取工藝,首先利用單因素試驗篩選初步的優(yōu)化提取因素,提取溶劑80％乙醇、提取溫度80℃、提取時間1

3、50 min、提取料液比1:40、提取次數2次。通過響應面分析法,回歸擬合程度好(P=0.0421<0.05),相關系數r=0.9810,軟件模擬喙果絞股藍總黃酮提取的最佳工藝條件為:乙醇濃度80.11％、提取溫度80.59℃、提取時間147.67 min、料液比為1:40、提取兩次。考慮實際操作,將喙果絞股藍的最佳提取條件為:乙醇濃度80％、提取溫度81℃、提取時間148 min、料液比為1:40、提取兩次。
　　 (3)7、

4、8、9、10、11月份的喙果絞股藍總黃酮含量隨月份變化而變化,,各月總黃酮含量依次為0.96％、1.54％、1.24％、1.04％、0.64％,其中8月的總黃酮含量最大,為1.54％,11月份的總黃酮的含量最低,為0.64％,各月份總黃酮含量差異較大。
　　 (4)建立RP-HPLC同時測定喙果絞股藍中蘆丁、槲皮素的方法,流動相條件為,甲醇-0.4％磷酸水溶液梯度洗脫(0～20 min,40％:60％,20～60 min,50％

5、:50％,60～75 min,60％:40％,75～90 min,70％:30％,v／v)；檢測波長:364 nm；流速:1 mL／min；柱溫:常溫。該方法簡便、準確度高、重復性好,為喙果絞股藍質量控制提供試驗依據。
　　 (5)7、8、9、10、11月份喙果絞股藍中蘆丁、槲皮素的含量隨月份變化而變化,具有動態(tài)變化規(guī)律,呈先升高后下降的趨勢,蘆丁在8月份時含量最高,平均質量分數達5.54 mg／g,槲皮素在9月份時含量較高,平

6、均質量分數達0.81.mg／g,各月份含量差異較大。
　　 (6)7、8、9、10、11月份喙果絞股藍總黃酮具有抗氧化活性,7～11月喙果絞股藍總黃酮消除超氧陰離子自由基(O2-·)能力,隨著供試品濃度的增大而增加,半消除率IC50分別為0.58 mg／mL、0.407 mg／mL、0.48 mg／mL、0.477 mg／mL、0.534 mg／mL,8月份消除能力最高,7月份最低；消除羥基自由基(·OH)能力隨著供試品濃度的增

7、加而增大,半消除率IC50分別為0.495 mg／mL、0.469 mg／mL、0.378 mg／mL、0.427 mg／mL、0.413 mg／mL,9月份消除能力最高,7月份最低；消除1,1-二苯基-2-苦苯腈自由基(DPPH·)能力隨著供試品濃度的增加而增大,半消除率IC50分別為0.57 mg／mL、0.513 mg／mL、0.478 mg／mL、0.543 mg／mL、0.619mg／mL,9月份消除能力最高,11月份最低；還

8、原能力隨著供試品濃度的增加而增大,當供試樣品濃度為0.1.25 mg／mL,各月份吸光度值依次分別為0.274、0.296、0.257、0.372、0.247,10月份還原能力最高,11月份最低。
　　 (7)通過黃酮類化合物的顏色反應初步鑒定喙果絞股藍中黃酮類化合物可能存在的成分:游離的黃酮類或黃酮苷、黃酮醇類、2-OH查耳酮或5-OH黃酮類。通過與蘆丁、槲皮素標準品對照,TLC展開劑為氯仿:甲醇:甲酸=8.8:1:0.1時能