脫水處理對草坪草脫水蛋白的積累研究及農(nóng)桿菌介導(dǎo)rd29A啟動子驅(qū)動的AVP1基因轉(zhuǎn)化匍匐翦股穎.pdf

1、草坪草在人類生活中的作用越來越重要，篩選與培育優(yōu)良的草坪草新品種是草坪業(yè)的重要任務(wù)。水分是限制草坪草生長的一個主要環(huán)境因子，當前我國特別缺乏抗旱的草坪草品種。研究草坪草的耐旱機理、培育抗旱草坪草具有廣闊的應(yīng)用前景。 本文研究了不同品種草坪草在脫水處理下的脫水蛋白表達情況，并建立了高效的草坪草胚性愈傷組織轉(zhuǎn)基因受體系統(tǒng)，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將擬南芥中克隆的AVP1基因轉(zhuǎn)入匍匐翦股穎，在誘導(dǎo)型的rd29A啟動子驅(qū)動下進行表達，期望獲得具

2、有耐干旱特性的優(yōu)良草坪草品種。 主要結(jié)果如下：1.本文研究了脫水處理下草坪草熱穩(wěn)定蛋白和脫水蛋白的積累情況。在緩慢脫水過程中，匍匐翦股穎、高羊茅和狗牙根的愈傷組織含水量(gH2O/gDW)與脫水時間成線性關(guān)系。當含水量低于10％時，兩種冷季型草坪草的愈傷組織中熱穩(wěn)定蛋白表達水平均明顯提高，但暖季型草坪草狗牙根卻出現(xiàn)了35kDa分子量的熱穩(wěn)定蛋白的減少。經(jīng)脫水蛋白的WesternBlot檢測，脫水處理后三種草坪草中均有脫水蛋白大量

3、積累，分子量從18.5到34.3kDa不等。暖季型和冷季型草坪草在熱穩(wěn)定蛋白和脫水蛋白表達上存在的差異，可能與它們的耐旱機理及耐旱性強弱差異有關(guān)。 2.建立了草坪草的愈傷組織遺傳轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)。本文分別對匍匐翦股穎、高羊茅和狗牙根的外植體進行誘導(dǎo)培養(yǎng)，獲得了愈傷組織。其中以冷季型草坪草匍匐翦股穎和高羊茅的種子為外植體的愈傷組織誘導(dǎo)率較高，分別為53.0±8.7％和60.7±7.9％，它們均能誘導(dǎo)產(chǎn)生胚性愈傷組織，胚性愈傷組織生長穩(wěn)

4、定，繼代一個月后生長速率可達206.0±43.7％和159.3±34.4％。而暖季型草坪草狗牙根用種子作為外植體的愈傷組織誘導(dǎo)率僅為14.7±4.0％，且只產(chǎn)生非胚性愈傷組織，該愈傷組織生長速率為78.4±23.2％；以狗牙根的節(jié)作為外植體可以誘導(dǎo)出胚性愈傷組織，但數(shù)次繼代后轉(zhuǎn)為非胚性愈傷組織。 3.從擬南芥中克隆了rd29A啟動子和AVP1基因。并在pCambia1302質(zhì)粒的基礎(chǔ)上構(gòu)建了rd29A誘導(dǎo)型啟動子的表達載體，以及