乙醛脫氫酶1用于乳腺癌干細胞的檢測及其生物學特性分析.pdf

1、背景及目的：目前認為乳腺癌可能是一種干細胞疾病，源自體內(nèi)少數(shù)具有自我更新和多向分化潛能的腫瘤干細胞。但因缺乏簡單的特異性干細胞標記物，使其研究大受限制。因此，近年來尋找乳腺癌干細胞標記物是當前乳腺癌干細胞研究的熱點。目前多數(shù)研究認為CD44+/CD24-/low表型是乳腺癌干細胞的特異性表面標記物，而乙醛脫氫酶1（ALDH1）活性是一通用的干細胞功能性標記物。本研究的目的即是探討ALDH1用于分選鑒定乳腺癌干細胞的可行性，分析ALDH1

2、+和CD44+/CD24-/low兩群乳腺癌細胞的生物學特性，著重分析這兩種細胞亞群之間的差異和是否存在交叉重疊現(xiàn)象，以及研究ALDH1+CD44+/CD24-/low群細胞的干細胞特性，并對乳腺癌組織及其對應(yīng)的復發(fā)轉(zhuǎn)移灶中ALDH1蛋白的表達是否發(fā)生變化進行分析。
　　方法：1.通過流式分選技術(shù)，從新鮮乳腺癌組織原代培養(yǎng)腫瘤細胞中分選CD44+/CD24-/low、ALDH1+和ALDH1+CD44+/CD24-/low細胞亞群

3、，分析各分選細胞占總腫瘤細胞的比例；2.通過克隆形成、細胞增殖實驗、transwell、免疫熒光實驗觀察各組細胞的自我更新、增殖和侵襲能力；3.通過裸鼠致瘤試驗觀察各組細胞的致瘤能力。4.應(yīng)用免疫組化的方法，回顧性分析87例乳腺癌標本中ALDH1蛋白的表達，并分析與對應(yīng)的復發(fā)轉(zhuǎn)移灶中，ALDH1蛋白的表達變化。
　　結(jié)果：對原代培養(yǎng)乳腺癌細胞進行流式分選后發(fā)現(xiàn)，CD44+/CD24-/low細胞占總細胞比例為7.2％；ALDH1+

4、細胞的比例為4.6％；ALDH1+CD44+/CD24-/low細胞占比為1.5％。三組細胞均具有干細胞特性，其自我更新、增殖、侵襲及致瘤能力由強至弱依次為ALDH1+CD44+/CD24-/low、ALDH1+細胞、CD44+/CD24-/low細胞。ALDH1蛋白在原發(fā)乳腺癌標本中的表達比例為28.7％，在對應(yīng)的復發(fā)轉(zhuǎn)移灶中表達的比例為43.7％,有顯著性差異。
　　結(jié)論：1.乳腺癌中存在CD44+/CD24-/low、ALD

5、H1+和ALDH1+CD44+/CD24-/low細胞亞群，均具有自我更新、高增殖、侵襲及致瘤能力，但ALDH1+CD44+/CD24-/low細胞亞群的自我更新、增殖、侵襲及致瘤能力最強，證明此群細胞具有更強的干細胞特性，ALDH1可作為可靠的乳腺癌干細胞標志物用于乳腺癌干細胞的檢測。聯(lián)合運用CD44+/CD24-/low和ALDH1可更特異性的鑒定、分選乳腺癌干細胞。2.乳腺癌復發(fā)轉(zhuǎn)移灶中乙醛脫氫酶1的表達率明顯高于對應(yīng)的原發(fā)灶，提