肺腺癌四種腫瘤標(biāo)志物的檢測及意義探討.pdf

1、目的： 探討腫瘤相關(guān)分子14-3-3σ、Akt、p27Kip1和p57Kip2蛋白在肺腺癌中的表達(dá)和臨床意義。 材料與方法： 收集中山大學(xué)腫瘤防治中心病理科1999年存檔的59例根治性手術(shù)切除的肺腺癌組織蠟塊；另外選取了10例肺良性病變組織蠟塊及16例癌旁正常肺組織石蠟標(biāo)本。應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)(SABC法)檢測組織中14-3-3σ蛋白、Akt及磷酸化Akt(Phosphated-Akt，P-Akt)蛋白、p27

2、Kip1和p57Kip2蛋白的表達(dá)，結(jié)合臨床病理資料和隨訪資料，進(jìn)行回顧性研究，并作出評價(jià)。 結(jié)果： (1)14-3-3σ蛋白陽性著色定位于細(xì)胞漿內(nèi)，在59例肺腺癌組織中表達(dá)陽性52例，其中強(qiáng)陽性19例，表達(dá)陽性率為88％，顯著高于正常肺組織中表達(dá)(15/26，陽性率58％)，P＜0.01。14-3-3σ在肺腺癌中的過量表達(dá)與腫瘤的分化程度，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和TNM分期相關(guān)，P＜0.05。低分化的肺腺癌中14-3-3

3、σ蛋白表達(dá)陽性率高于中、高分化腫瘤；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的肺腺癌患者中14-3-3σ的表達(dá)增多；14-3-3σ蛋白的表達(dá)且隨著臨床分期的增高而明顯增加。壽命表和單因素生存分析提示，14-3-3σ陽性表達(dá)者術(shù)后三年生存率和中位生存時(shí)間低于陰性表達(dá)者，P值小于0.05。Cox多重回歸模型分析的結(jié)果提示14-3-3σ蛋白表達(dá)增高，肺腺癌的預(yù)后愈差，結(jié)果說明14-3-3σ可作為肺腺癌判斷預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。 (2)肺腺癌中Akt蛋白在

4、細(xì)胞漿表達(dá)陽性，陽性著色主要在胞漿，部分可見于胞核，陽性率為88％，顯著高于正常肺組織23％，P值小于0.01；Akt的活化形式P-Akt蛋白，在肺腺癌中表達(dá)的陽性率為32％，也高于正常肺組織中表達(dá)(4％)，二者差異有顯著性，P＜0.01。Akt蛋白陽性表達(dá)與肺腺癌組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期顯著相關(guān)。腫瘤分化程度越低、臨床分期越高、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，Akt蛋白的表達(dá)水平更高，P＜0.05；而P-Akt蛋白陽性表達(dá)除了與肺腺癌的

5、組織分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期有關(guān)外，還與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，P＜0.05。Akt蛋白陽性表達(dá)者和強(qiáng)陽性表達(dá)者，肺腺癌患者術(shù)后三年生存率為31.6％和0％、中位生存時(shí)間為20個(gè)月和8個(gè)月，低于陰性表達(dá)者三年生存率(50％)與中位生存時(shí)間(25個(gè)月)，P值小于0.05；P-Akt蛋白陽性表達(dá)者三年生存率為0％，中位生存時(shí)間為9個(gè)月，顯著低于陰性表達(dá)者(33％、21個(gè)月)，P＜0.05。Cox多重回歸模型分析表明P-Akt蛋白胞漿/核表達(dá)與預(yù)

6、后密切相關(guān)，是預(yù)測肺腺癌患者不良預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。 (3)p27Kip1蛋白在肺腺癌細(xì)胞核和/或細(xì)胞漿都有表達(dá)。胞核表達(dá)陽性率為37％，顯著低于正常肺組織胞核表達(dá)(81％)，P＜0.01；胞漿表達(dá)豐富，陽性率為81％，高于正常肺組織胞漿表達(dá)(38％)，P值小于0.05。p27Kip1蛋白胞核表達(dá)與胞漿表達(dá)的相關(guān)性分析，表明二者呈負(fù)相關(guān)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。此外，p27Kip1蛋白胞核表達(dá)與肺腺癌組織分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及臨床分

7、期呈負(fù)相關(guān)；而p27Kip1蛋白胞漿表達(dá)則與腫瘤細(xì)胞的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期呈正相關(guān)。肺腺癌組織中p27Kip1蛋白胞核表達(dá)陰性者三年生存率為4％、中位生存時(shí)間為11個(gè)月，顯著低于胞核表達(dá)陽性者(53.3％、53個(gè)月)；p27Kip1胞漿表達(dá)的情況則相反。Cox多重回歸分析表明，p27Kip1可以作為一個(gè)獨(dú)立的評價(jià)腫瘤預(yù)后的指標(biāo)，p27Kip1胞核水平越低預(yù)示著腫瘤預(yù)后越差。 (4)p57Kip2蛋白在肺腺癌組織中的胞核

8、表達(dá)陽性率為37％，明顯低于正常肺組織的陽性率85％，P＜0.01。本研究中p57Kip2蛋白胞核表達(dá)與肺腺癌的高、中、低分化顯著相關(guān)，分化程度越低的肺腺癌p57Kip2蛋白表達(dá)更低。但p57Kip2與腫瘤大小、肺腺癌組織類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移以及臨床分期無關(guān)。肺腺癌組織中p57Kip2蛋白胞核表達(dá)陰性者三年生存率和中位生存時(shí)間分別為15.4％、13個(gè)月，高于表達(dá)陰性者(35.7％、25個(gè)月)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Cox多因素回歸分析提示

9、，在肺腺癌中p57Kip2蛋白不能作為一個(gè)獨(dú)立的預(yù)后因素。此外，在肺腺癌組織中p57Kip2蛋白與p27Kip1蛋白類似，除了在細(xì)胞核表達(dá)外，在細(xì)胞漿也有表達(dá)。經(jīng)計(jì)數(shù)，胞漿中p57Kip2蛋白陽性率為64％，高于正常肺組織胞漿陽性率(35％)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但p57Kip2蛋白胞核與胞漿中表達(dá)的相關(guān)性分析，沒有見到二者呈負(fù)相關(guān)，且無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 (5)14-3-3σ、Akt及P-Akt以及p27Kip1、p57Kip2蛋白這

10、四種分子在肺腺癌組織中表達(dá)的相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)：P-Akt和Akt呈正相關(guān)，P＜0.05。P-Akt與p27Kip1胞核表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，而與p27Kip1胞漿表達(dá)呈正相關(guān)；14-3-3σ蛋白與p27Kip1蛋白胞核、胞漿表達(dá)的關(guān)系與P-Akt類似。p27Kip1蛋白胞核表達(dá)與p57Kip2蛋白胞核表達(dá)呈正相關(guān)；但p57Kip2蛋白與Akt、P-Akt和14-3-3σ則無明顯相關(guān)。 討論： 本研究在59例肺腺癌組織和26例正常肺

11、組織中檢測了14-3-3σ、Akt及磷酸化(P-Akt)蛋白、細(xì)胞周期負(fù)調(diào)控因子p27Kip1和p57Kip2四種腫瘤相關(guān)分子的表達(dá)情況。研究發(fā)現(xiàn)，在肺腺癌組織中14-3-3σ蛋白過表達(dá)；Akt蛋白表達(dá)增高且過度活化；p27Kip1和p57Kip2在肺腺癌中陽性著色有兩種定位(胞核和/或胞漿)，其中胞核中的陽性表達(dá)較正常對照是顯著下降的，而胞漿中陽性表達(dá)則明顯增多。這四種分子在肺腺癌和正常肺組織中表達(dá)的差異，說明它們在肺腺癌的發(fā)生發(fā)展中

12、扮演著不同的角色。結(jié)合這四種腫瘤相關(guān)蛋白與肺腺癌的臨床病理指標(biāo)的相關(guān)關(guān)系研究及壽命表和生存分析，提示我們，14-3-3σ蛋白過量表達(dá)、Akt蛋白表達(dá)增多和過度活化促進(jìn)了肺腺癌的發(fā)生發(fā)展，是肺腺癌患者預(yù)后差的潛在因素；p27Kip1蛋白和p57Kip2蛋白作為腫瘤抑制因子，在肺腺癌組織中表達(dá)的異常定位(胞核表達(dá)減少，胞漿表達(dá)增多)，是肺腺癌患者預(yù)后不良的因素之一。多重回歸分析14-3-3σ、P-Akt、p27Kip1蛋白胞核表達(dá)以及腫瘤組

13、織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是判斷肺腺癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)指標(biāo)。 本研究對14-3-3σ、Akt及P-Akt蛋白、p27Kip1蛋白(胞核與胞漿)和p57Kip2蛋白(胞核與胞漿)在肺腺癌中表達(dá)的相關(guān)性分析提示，14-3-3σ蛋白和P-Akt蛋白與p27Kip1蛋白在胞核、胞漿中異常定位關(guān)系密切。結(jié)合14-3-3σ蛋白和P-Akt蛋白的背景知識，我們推測14-3-3σ蛋白和P-Akt蛋白可能通過調(diào)控p27Kip1蛋白從胞核泄

14、漏到胞漿，并滯留在胞漿，使p27Kip1蛋白不能發(fā)揮其在胞核中的抑瘤作用，進(jìn)而促進(jìn)了肺腺癌的發(fā)生發(fā)展，影響其生存預(yù)后。p57Kip2與p27Kip1是同一家族成員，在肺腺癌中的表達(dá)與p27Kip1蛋白類似，有胞核減少、胞漿增多的趨勢，但相關(guān)性分析表明其異常定位與14-3-3σ蛋白和P-Akt蛋白關(guān)系不明顯，p57Kip2蛋白在肺腺癌中的異常定位機(jī)制還有待進(jìn)一步探討。下一步工作我們將在分子水平深入研究14-3-3σ、Akt和p27Kip1