可溶性Tie2融合蛋白對(duì)尿毒癥腹膜透析大鼠血管新生的影響.pdf

1、背景和目的：
　　 終末期腎臟病(end—stage renal disease,ESRD)已成為21世紀(jì)全人類面臨的主要公共健康問(wèn)題之一。腹膜透析(peritoneal dialysis,PD)是終末期腎臟病患者主要的替代治療方式之一。由于其具有簡(jiǎn)便的家居模式、不需要依賴特殊設(shè)備、對(duì)血流動(dòng)力學(xué)影響小、交叉感染率低、更好的殘余腎保護(hù)功能等優(yōu)點(diǎn),已被越來(lái)越多的終末期腎臟病患者所接受。長(zhǎng)期腹膜透析后腹膜發(fā)生血管新生和通透性增加,導(dǎo)致

2、腹膜超濾功能受損,乃至發(fā)生超濾衰竭(ultrafiltration failure,UFF)。超濾衰竭是患者被迫退出腹膜透析的主要原因之一。對(duì)發(fā)生超濾衰竭患者的腹膜行病理學(xué)檢查,發(fā)現(xiàn)腹膜組織確實(shí)存在新生血管增多的現(xiàn)象。目前認(rèn)為,腹膜新生血管的形成在超濾衰竭的諸多發(fā)生機(jī)制中居于主導(dǎo)地位。
　　 近期發(fā)現(xiàn),血管生成素-2(angiopoietin,Angpt-2)及其受體Tie-2是與血管新生和功能改變密切相關(guān)的一類細(xì)胞因子。血管生

3、成素-2的受體 Tie-2的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域在蛋白酶裂解作用下可脫落,形成可溶性的 Tie-2受體；其可以和 Tie-2競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合血管生成素-2,從而抑制其生物學(xué)活性的發(fā)揮。研究發(fā)現(xiàn),使用重組的可溶性Tie2融合蛋白(soluble Tie2 fusion protein,sTie2／Fc)可以抑制腫瘤的血管新生,但其是否能抑制腹膜的血管新生尚未見(jiàn)報(bào)導(dǎo)。因此,本研究利用尿毒癥腹膜透析大鼠模型模擬人體內(nèi)腹膜透析過(guò)程,觀察使用重組大鼠可溶性Ti

4、e2融合蛋白干預(yù)后,血管生成素-2和微血管密度(Microvessel Density,MVD)在尿毒癥腹膜透析大鼠腹膜組織的表達(dá)變化,并初步探討其可能的作用機(jī)制,為干預(yù)腹膜血管新生提供新的靶點(diǎn),為臨床防治血管新生導(dǎo)致的腹膜透析超濾衰竭提供理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 48只雄性SD大鼠,清潔級(jí),體質(zhì)量180-200g。按照5／6腎切除法制作尿毒癥大鼠模型,在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步構(gòu)建腹膜透析模型。假手術(shù)組大鼠行雙腎腎包膜剔除

5、術(shù)。按隨機(jī)數(shù)字表法分為以下6組,每組各8只:A:正常對(duì)照組、B:假手術(shù)組、C:尿毒癥非腹透組、D:4.25％腹透組、E:重組大鼠可溶性 Tie2融合蛋白0.25ug／100g干預(yù)組、F:重組大鼠可溶性Tie2融合蛋白0.50ug／100g干預(yù)組。腹透組按照每天4.25％腹透液3ml／100g大鼠體重規(guī)律腹透28天。規(guī)律腹透期間,干預(yù)組給予sTie2／Fc隔天1次皮下注射,共計(jì)14次。28天腹透及干預(yù)治療結(jié)束后,取以上各組大鼠腹膜組織,分

6、別用免疫組織化學(xué)染色法和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)腹膜組織血管生成素-2在蛋白、mRNA水平的表達(dá)情況；CD34染色觀察腹膜組織微血管密度。對(duì)以上數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,選取P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 1.與正常組相比較,假手術(shù)組大鼠腹膜組織Angpt-2 mRNA、蛋白表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。尿毒癥非腹透組、4.25％腹透組Angpt-2 mRNA、蛋白表達(dá)均顯著高于正常對(duì)照

7、組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)；4.25％腹透組Angpt-2mRNA、蛋白表達(dá)顯著高于尿毒癥非腹透組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。重組大鼠可溶性Tie2融合蛋白0.25ug／100g干預(yù)組和0.50ug／100g干預(yù)組Angpt-2mRNA、蛋白表達(dá)均顯著低于4.25％腹透組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)；與重組大鼠可溶性Tie2融合蛋白0.25ug／100g干預(yù)組相比,重組大鼠可溶性 Tie2融合蛋白0.50ug

8、／100g干預(yù)組Angpt-2 mRNA、蛋白表達(dá)降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 2.與正常組相比較,假手術(shù)組大鼠腹膜組織MVD值變化差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。尿毒癥非腹透組、4.25％腹透組MVD值均顯著高于正常對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)；4.25％腹透組MVD值顯著高于尿毒癥非腹透組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。重組大鼠可溶性Tie2融合蛋白0.25ug／100g干預(yù)組和0.50

9、ug／100g干預(yù)組MVD值均顯著低于4.25％腹透組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)；與重組大鼠可溶性Tie2融合蛋白0.25ug／100g干預(yù)組相比,重組大鼠可溶性Tie2融合蛋白0.50ug／100g干預(yù)組Angpt-2 MVD值降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 3.Angpt-2的蛋白表達(dá)量和MVD呈正相關(guān),Angpt-2和尿毒癥長(zhǎng)期腹膜透析時(shí)血管新生相關(guān)。
　　 結(jié)論：
　　 1.尿毒