GLUT1和SGLT1在尿毒癥腹膜透析大鼠腹膜中的表達(dá)與腹膜纖維化的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：在我國(guó)，腎臟病學(xué)不斷發(fā)展，腎臟替代治療中的腹膜透析（peritoneal dialysis）治療在臨床上也越來(lái)越得到病患與醫(yī)生們的肯定。但是腹膜透析的局限性主要還是集中在高糖透析液導(dǎo)致的腹膜纖維而致超濾衰竭，最終患者只能無(wú)奈退出治療。高糖誘導(dǎo)導(dǎo)致腹膜纖維化的研究已經(jīng)較為成熟，而高糖是通過(guò)何種途徑導(dǎo)致腹膜纖維化的研究還較為有限。本研究的研究目的在于研究葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在腹膜中的表達(dá)與腹膜纖維化的相關(guān)性，我們通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)檢測(cè)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋

2、白1（GLUT1）和鈉-葡萄糖協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1（SGLT1）在尿毒癥腹膜透析大鼠在參與不同濃度的腹透液治療中的表達(dá)，同時(shí)檢測(cè)大鼠腹膜上促纖維化相關(guān)性因子的的表達(dá)量，最后利用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析他們的相關(guān)性，了解葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白這一通道與腹膜纖維化之間的相關(guān)性。同時(shí)我們還研究了它們對(duì)幾種常見(jiàn)的促纖維化因子的表達(dá)的影響，這其中包括了：纖連蛋白（fibronectin FN）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因 A（vascular endothelial growth fa

3、ctor A，VEGF-A）、結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(connective tissue growth factor，CTGF)和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)。通過(guò)這一研究，希望能為臨床尿毒癥患者的腹膜纖維化的發(fā)生以及治療靶點(diǎn)提供新的理論思考。
　　方法：56只健康雄性 SD大鼠（浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供），體重量在280~300g之間，SPF級(jí)別，恒溫22±3℃，適應(yīng)性喂

4、養(yǎng)一周。除正常組外，其余手術(shù)，制模成功后隨機(jī)分成8組：N組（n=6，對(duì)照組）；S組：假手術(shù)組，剝除雙側(cè)的腎包膜（n=6，手術(shù)對(duì)照組）；SP1.5％組（n=6，1.5%腹透液10ml/次，2次/日，1個(gè)月透析治療）；SP2.5%組（n=6，2.5%腹透液10ml/次，2次/日，1個(gè)月透析治療）；SP4.25%組（n=6，4.25%腹透液10ml/次，2次/日，1個(gè)月透析治療）：SP2.5%+T組（n=6，尿毒癥2.5%腹透液10ml/次，

5、2次/日，1個(gè)月透析治療加 Phloretin20mg/kg/day）；SP2.5%+Z組（n=6，尿毒癥2.5%腹透液10ml/次，2次/日，1個(gè)月透析治療加 PhloreZin20mg/kg/day）；SP2.5%+T+Z組（n=6，尿毒癥2.5%腹透液10ml/次，2次/日，1個(gè)月透析治療加 Phloretin20mg/kg/day和 phloridzin20mg/kg/day）。透析4周后行60ming腹膜平衡試驗(yàn)（Perito

6、neal equilibration test，PET），準(zhǔn)確收集測(cè)量腹內(nèi)液體，同時(shí)計(jì)算他們的超濾量(Ultrafiltration，UF)。生物技術(shù)檢測(cè)腹透大鼠透出液肌酐（D-cr），血清肌酐（P-cr），檢測(cè)初始的腹透液糖(D0)和最終透出液糖(D1)，并計(jì)算 D／P-cr、D1／D0。之后處死大鼠，取大鼠壁層腹膜行病理學(xué)檢測(cè)，從形態(tài)學(xué)上觀測(cè)腹膜的變化，通過(guò)蛋白質(zhì)印跡法(Western blotting)檢測(cè)腹膜 GULT1、SGL

7、T1、TGF-β1、VEGF-A和 CTGF的蛋白表達(dá)情況，qRT-PCR檢測(cè)GULT1、SGLT1、TGF-β1、VEGF-A和 CTGF mRNA變化，最后使用免疫組織化學(xué)的實(shí)驗(yàn)方法證實(shí)各個(gè)因子在腹膜上確有表達(dá)。
　　結(jié)果：1).腹膜形態(tài)：與 S組比較，SP1.5%、SP2.5%、SP4.25%組腹膜增厚顯著（P<0.05）；與 SP2.5%組比較，SP2.5%+T、SP2.5%+Z、SP2.5%+T+Z組腹膜增厚程度明顯減輕

8、（P<0.05）。2).腹膜平衡實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與 S組比較，SP1.5%、SP2.5%、SP4.25%組 UF（超濾量）以及 D1/D0明顯減少（P<0.05，與 SP2.5%組比較，SP2.5%+T、SP2.5%+Z、SP2.5%+T+Z組 UF（超濾量）以及D1/D0明顯增加（P<0.05）；與 S組比較，SP1.5%、SP2.5%、SP4.25%組 D/P-cr明顯增加（P<0.05），與 SP2.5%組比較，SP2.5%+T、S

9、P2.5%+Z、SP2.5%+T+Z組 D/P-cr明顯減少（P<0.05）。3).免疫組織化學(xué)染色結(jié)果提示，GULT1、SGLT1、TGF-β1、VEGF-A和 CTGF等因子均有表達(dá)。蛋白質(zhì)印跡法與 qRT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與 S組相比，SP1.5%、SP2.5%、SP4.25%組在透析后GULT1、SGLT1、TGF-β1、VEGF-A和 CTGF mRNA和蛋白表達(dá)均顯著升高（P<0.05)；與 SP2.5%組比較，SP2.

10、5%+T、SP2.5%+Z、SP2.5%+T+Z組在加入了拮抗劑后 GULT1、SGLT1、TGF-β1、VEGF-A和 CTGF mRNA和蛋白表達(dá)均顯著降低（P<0.05)； S組與 N組相比較 GULT1、SGLT1、TGF-β1、VEGF-A和 CTGF mRNA和蛋白表達(dá)的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。4). GULT1的蛋白表達(dá)與 TGF-β1的蛋白表達(dá)呈正相關(guān)（R=0.8138，P<0.05）、SGLT1的蛋白表達(dá)與

11、 TGF-β1的蛋白表達(dá)呈正相關(guān)（R=0.705，P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.本實(shí)驗(yàn)良好得建立了尿毒癥大鼠的腹膜透析模型；
　　2. GULT1以及 SGLT1在腹膜細(xì)胞上上均有表達(dá)；
　　3. Phloretin和 phloridzin可以減緩腹膜透析大鼠的腹膜纖維化進(jìn)展程度，可以抑制大鼠腹膜上的TGF-β1、VEGF-A和 CTGF的表達(dá)；
　　4. Phloretin和 phloridzin