GLUT1和SGLT1在尿毒癥腹膜透析大鼠腹膜中的表達(dá)與腹膜纖維化的相關(guān)性研究.pdf_第1頁(yè)
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1、目的:在我國(guó),腎臟病學(xué)不斷發(fā)展,腎臟替代治療中的腹膜透析(peritoneal dialysis)治療在臨床上也越來(lái)越得到病患與醫(yī)生們的肯定。但是腹膜透析的局限性主要還是集中在高糖透析液導(dǎo)致的腹膜纖維而致超濾衰竭,最終患者只能無(wú)奈退出治療。高糖誘導(dǎo)導(dǎo)致腹膜纖維化的研究已經(jīng)較為成熟,而高糖是通過(guò)何種途徑導(dǎo)致腹膜纖維化的研究還較為有限。本研究的研究目的在于研究葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在腹膜中的表達(dá)與腹膜纖維化的相關(guān)性,我們通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)檢測(cè)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋

2、白1(GLUT1)和鈉-葡萄糖協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(SGLT1)在尿毒癥腹膜透析大鼠在參與不同濃度的腹透液治療中的表達(dá),同時(shí)檢測(cè)大鼠腹膜上促纖維化相關(guān)性因子的的表達(dá)量,最后利用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析他們的相關(guān)性,了解葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白這一通道與腹膜纖維化之間的相關(guān)性。同時(shí)我們還研究了它們對(duì)幾種常見(jiàn)的促纖維化因子的表達(dá)的影響,這其中包括了:纖連蛋白(fibronectin FN)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因 A(vascular endothelial growth fa

3、ctor A,VEGF-A)、結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(connective tissue growth factor,CTGF)和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)。通過(guò)這一研究,希望能為臨床尿毒癥患者的腹膜纖維化的發(fā)生以及治療靶點(diǎn)提供新的理論思考。
  方法:56只健康雄性 SD大鼠(浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供),體重量在280~300g之間,SPF級(jí)別,恒溫22±3℃,適應(yīng)性喂

4、養(yǎng)一周。除正常組外,其余手術(shù),制模成功后隨機(jī)分成8組:N組(n=6,對(duì)照組);S組:假手術(shù)組,剝除雙側(cè)的腎包膜(n=6,手術(shù)對(duì)照組);SP1.5%組(n=6,1.5%腹透液10ml/次,2次/日,1個(gè)月透析治療);SP2.5%組(n=6,2.5%腹透液10ml/次,2次/日,1個(gè)月透析治療);SP4.25%組(n=6,4.25%腹透液10ml/次,2次/日,1個(gè)月透析治療):SP2.5%+T組(n=6,尿毒癥2.5%腹透液10ml/次,

5、2次/日,1個(gè)月透析治療加 Phloretin20mg/kg/day);SP2.5%+Z組(n=6,尿毒癥2.5%腹透液10ml/次,2次/日,1個(gè)月透析治療加 PhloreZin20mg/kg/day);SP2.5%+T+Z組(n=6,尿毒癥2.5%腹透液10ml/次,2次/日,1個(gè)月透析治療加 Phloretin20mg/kg/day和 phloridzin20mg/kg/day)。透析4周后行60ming腹膜平衡試驗(yàn)(Perito

6、neal equilibration test,PET),準(zhǔn)確收集測(cè)量腹內(nèi)液體,同時(shí)計(jì)算他們的超濾量(Ultrafiltration,UF)。生物技術(shù)檢測(cè)腹透大鼠透出液肌酐(D-cr),血清肌酐(P-cr),檢測(cè)初始的腹透液糖(D0)和最終透出液糖(D1),并計(jì)算 D/P-cr、D1/D0。之后處死大鼠,取大鼠壁層腹膜行病理學(xué)檢測(cè),從形態(tài)學(xué)上觀測(cè)腹膜的變化,通過(guò)蛋白質(zhì)印跡法(Western blotting)檢測(cè)腹膜 GULT1、SGL

7、T1、TGF-β1、VEGF-A和 CTGF的蛋白表達(dá)情況,qRT-PCR檢測(cè)GULT1、SGLT1、TGF-β1、VEGF-A和 CTGF mRNA變化,最后使用免疫組織化學(xué)的實(shí)驗(yàn)方法證實(shí)各個(gè)因子在腹膜上確有表達(dá)。
  結(jié)果:1).腹膜形態(tài):與 S組比較,SP1.5%、SP2.5%、SP4.25%組腹膜增厚顯著(P<0.05);與 SP2.5%組比較,SP2.5%+T、SP2.5%+Z、SP2.5%+T+Z組腹膜增厚程度明顯減輕

8、(P<0.05)。2).腹膜平衡實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:與 S組比較,SP1.5%、SP2.5%、SP4.25%組 UF(超濾量)以及 D1/D0明顯減少(P<0.05,與 SP2.5%組比較,SP2.5%+T、SP2.5%+Z、SP2.5%+T+Z組 UF(超濾量)以及D1/D0明顯增加(P<0.05);與 S組比較,SP1.5%、SP2.5%、SP4.25%組 D/P-cr明顯增加(P<0.05),與 SP2.5%組比較,SP2.5%+T、S

9、P2.5%+Z、SP2.5%+T+Z組 D/P-cr明顯減少(P<0.05)。3).免疫組織化學(xué)染色結(jié)果提示,GULT1、SGLT1、TGF-β1、VEGF-A和 CTGF等因子均有表達(dá)。蛋白質(zhì)印跡法與 qRT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,與 S組相比,SP1.5%、SP2.5%、SP4.25%組在透析后GULT1、SGLT1、TGF-β1、VEGF-A和 CTGF mRNA和蛋白表達(dá)均顯著升高(P<0.05);與 SP2.5%組比較,SP2.

10、5%+T、SP2.5%+Z、SP2.5%+T+Z組在加入了拮抗劑后 GULT1、SGLT1、TGF-β1、VEGF-A和 CTGF mRNA和蛋白表達(dá)均顯著降低(P<0.05); S組與 N組相比較 GULT1、SGLT1、TGF-β1、VEGF-A和 CTGF mRNA和蛋白表達(dá)的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。4). GULT1的蛋白表達(dá)與 TGF-β1的蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(R=0.8138,P<0.05)、SGLT1的蛋白表達(dá)與

11、 TGF-β1的蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(R=0.705,P<0.05)。
  結(jié)論:
  1.本實(shí)驗(yàn)良好得建立了尿毒癥大鼠的腹膜透析模型;
  2. GULT1以及 SGLT1在腹膜細(xì)胞上上均有表達(dá);
  3. Phloretin和 phloridzin可以減緩腹膜透析大鼠的腹膜纖維化進(jìn)展程度,可以抑制大鼠腹膜上的TGF-β1、VEGF-A和 CTGF的表達(dá);
  4. Phloretin和 phloridzin

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