布氏桿菌BP26抗原特異單克隆抗體的制備與初步應用.pdf

1、布氏桿菌病是由布氏桿菌引起的一種人畜共患病，給畜牧業(yè)的發(fā)展和人類的健康帶來嚴重的危害。世界統(tǒng)計資料表明，每年因布氏桿菌病造成的經濟損失將近30億美元。由它引發(fā)的人類波浪熱、慢性感染以及反芻動物流產和睪丸炎等疾病，至今仍無法根治。此外，布氏桿菌還被用作生物武器。由此可見，布氏桿菌對我國經濟建設、人民健康生活、國家安全等存在著嚴重威脅。布氏桿菌病的發(fā)病特點是，一旦發(fā)病并轉入慢性就無法治愈，因此，控制布氏桿菌病最關鍵的是預防。傳統(tǒng)的血清學診斷

2、存在假陽性血清學反應。假陽性的原因是由于布氏桿菌S-LPS與其他一些革蘭氏陰性菌表面的LPS的相似結構引起的交叉反應。常用的布氏桿菌病血清學診斷方法無法區(qū)分疫苗免疫和自然感染而引起的血清學反應，研制具有標記性的疫苗以及尋找合適的布氏桿菌診斷性抗原一直是研究者的目標。
　　 BP26蛋白是布氏桿菌的一個周質蛋白，是布氏桿菌非常重要的診斷抗原之一，已有很多用此抗原來進行布氏桿菌診斷的報道。BP26蛋白對布氏桿菌的毒力不起決定性的作用

3、，但卻是布氏桿菌的一個優(yōu)勢抗原，能夠誘導產生高滴度的抗體。BP26的這個特性，為我們研究基因標記疫苗提供了很好的靶標。如果將該抗原進行缺失標記，一方面可能將標記株的毒力降低，另一方面也為建立鑒別診斷方法提供標識序列。
　　 本研究通過原核表達系統(tǒng)表達并純化兩種蛋白pET-30a（+）-bp26和pGEX-6P-1-bp26。用重組蛋白pET-30a（+）-bp26免疫6周齡BALB/c小鼠，加強免疫后取脾細胞與SP2/0細胞進行

4、細胞融合。應用重組蛋白pGEX-6P-1-bp26作為包被抗原，采用間接ELISA方法篩選陽性克隆。經4次克隆，獲得5株抗體效價較高的抗BP26蛋白特異性單克隆抗體，分別命名為：3AG5、3AG6、3CE10、4EA2和4EF3。亞型分析得出：重鏈亞型均為IgG1，輕鏈均為Kappa鏈。應用大腸桿菌O:157、小腸結腸炎耶爾森菌O:9、沙門氏菌等菌體裂解液作為抗原檢測，均無交叉反應。Western blotting特異性檢測這5株Mab

5、s，與B.melitensisM5-90天然菌體反應，但是不與M5-90-△26缺失疫苗株反應。這5株單克隆抗體具有高度特異性，在布氏桿菌的檢測方面，具有潛在的應用價值。
　　 本研究將制備的單克隆抗體初步應用于競爭ELISA中，發(fā)現(xiàn)此單克隆抗體對牛種布氏桿菌的檢測效果較為理想，有望將其應用到布氏桿菌的臨床檢測中。可以根據本研究制備的單克隆抗體來建立血清學鑒別診斷方法，以及區(qū)分是自然感染還是疫苗免疫，能夠為本研究組構建的兩株bp