CLU基因多態(tài)性與漢族人阿爾茨海默病的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、目的:通過檢測聚集素基因(Clusterin gene，CLU)單核苷酸多態(tài)位點(diǎn)(SNPs)，探討其與中國北方漢族人群晚發(fā)型阿爾茨海默病(late onset Alzheimer'sdisease，LOAD)的相互關(guān)系。
　　方法:1、應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-連接酶檢測反應(yīng)技術(shù)（iMLDRTM多重SNP分型技術(shù)，PCR-LDR）方法，我們對(duì)隨機(jī)選取的50例LOAD患者及年齡和性別相匹配的50例健康老年人進(jìn)行全面的CLU基因測序，并篩選

2、CLU基因啟動(dòng)子、全部外顯子及包括剪切位點(diǎn)的側(cè)翼區(qū)等全部功能性區(qū)域的功能性單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)(SNPs)。根據(jù)這100個(gè)樣本的所有基因型數(shù)據(jù)，通過Haploview4.2軟件作圖分析，并根據(jù)最小等位基因不小于0.05(MAF≥0.05)和r2＞0.82的原則和標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)一步篩選出功能性的SNP位點(diǎn)。2、應(yīng)用大樣本病例對(duì)照的研究方法，我們共入選LOAD患者796例，同期年齡和性別完全匹配的對(duì)照組796例。多態(tài)性基因分型分析采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-

3、連接酶檢測反應(yīng)(PCR-LDR)技術(shù)，檢測篩選的部分CLU基因多態(tài)性位點(diǎn)的基因型、等位基因多態(tài)性的分布，應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-連接酶檢測反應(yīng)技術(shù)(PCR-LDR)檢測APOE的基因型并分型。SNPs的等位基因和基因型頻率分布在病例組和對(duì)照組的比較采用卡方檢驗(yàn)。進(jìn)一步結(jié)合研究人群的APOE分型，計(jì)算比值比(OR)和95％可信區(qū)間，進(jìn)行多因素logistic回歸分析來校正性別、年齡和APOE□4基因型，以確立與AD發(fā)病顯著關(guān)聯(lián)的獨(dú)立遺傳風(fēng)險(xiǎn)因

4、子。
　　結(jié)果:1、經(jīng)過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-連接酶檢測反應(yīng)技術(shù)(PCR-LDR)測序方法，在小樣本中，初步得到18個(gè)功能性的SNP位點(diǎn)，其中11個(gè)為SNP數(shù)據(jù)庫中已知的SNP，另外7個(gè)是新發(fā)現(xiàn)的、極低頻的多態(tài)位點(diǎn)。根據(jù)以上的標(biāo)準(zhǔn)和原則進(jìn)一步篩選出11個(gè)功能性SNP位點(diǎn):rs881146，rs7012010，rs17466684，rs17057441，rs2279591，rs9331949,rs9331942，rs3087554，rs3

5、216167，rs7982，rs1532278。2、如預(yù)期所料，對(duì)兩組受試者進(jìn)行APOE基因分型后，APOE□4等位基因攜帶者中患晚發(fā)型阿爾茨海默病的風(fēng)險(xiǎn)較APOE□4的非攜帶者顯著增高(OR=1.854，95％ CI=1.443-2.382，P＜0.001)。3、在全部樣本中，通過對(duì)篩選出的11個(gè)功能性SNP位點(diǎn)的基因檢測，我們發(fā)現(xiàn)兩組間只有位于3'非翻譯區(qū)域的rs9331949多態(tài)性位點(diǎn)的等位基因和基因型有顯著性差異(等位基因，P=

6、0.003;基因型，P=0.006)，其中最小等位基因C在LOAD中的發(fā)生率明顯的高于對(duì)照組(OR=1.286，95％CI=1.088-1.519，P＜0.001)。進(jìn)一步按照是否攜帶APOE□4等位基因進(jìn)行分組后，rs9331949的最小等位基因C在APOE□4等位基因攜帶者中的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(OR=1.625;95％CI=1.087-2.430)仍然明顯高于APOE□4非攜帶(OR=1.232;95％CI=1.023-1.484)。多因素

7、Logistic回歸分析顯示，在平衡了“性別”、“年齡”、“APOE□4基因型”等因素后，攜帶rs9331949最小等位基因C能明顯增加LOAD發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。而且不論在疊加模型、顯性模型還是在隱性模型中，在阿爾茨海默病患者組和對(duì)照組中均存在明顯的差異性:疊加模型P值=0.004，比值比(OR)=1.274;顯性模型P=0.039，OR=1.239;隱性模型P=0.002，OR=1.975。rs9331949多態(tài)性位點(diǎn)的最小等位基因C在三種遺

8、傳模型中均能夠增加阿爾茨海默病的危險(xiǎn)性。此外，多態(tài)性位點(diǎn)單倍體型分析中發(fā)現(xiàn)CG-Hap2、TG-Hap3、CA-Hap4單倍體型與LOAD相關(guān)聯(lián)，其中Hap2、Hap4為危險(xiǎn)性單倍體型，而Hap3為保護(hù)性單倍體型。
　　結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在中國北方漢族人群中，ApoE基因多態(tài)性與LOAD易感性有關(guān)，APOE□4等位基因攜帶者患晚發(fā)型阿爾茨海默病的風(fēng)險(xiǎn)明顯升高。在中國北方漢族人群中，CLU基因的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)與晚發(fā)型阿爾茨海