減毒沙門氏菌為載體的CEACAM6聯(lián)合4-1BBL基因疫苗對實驗性大腸癌生長的影響.pdf

1、本文從以下幾部分進行了論述。
　　第一部分:重組大鼠pIRES-CEACAM6-4-1BBL真核表達載體的構(gòu)建及功能鑒定
　　目的:構(gòu)建含pIRES-CEACAM6-4-1BBL的真核表達質(zhì)粒。
　　方法:從大鼠睪丸中克隆出大鼠CEACAM6基因全長,聯(lián)合本實驗室先前保存的4-1BBL基因,構(gòu)建質(zhì)粒并通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染COS7細胞,免疫雙熒光法檢測目的蛋白CEACAM6、4-1BBL的表達。
　　結(jié)果:成功構(gòu)建三個質(zhì)

2、粒:pIRES-CEACAM6、pIRES-4-1BBL、pIRES-CEACAM6-4-1BBL,并通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染COS7細胞,證明重組質(zhì)粒能表達相應(yīng)的基因。
　　結(jié)論:成功構(gòu)建了攜帶大鼠4-1BBL和CEACAM6基因的真核表達質(zhì)粒。
　　第二部分:含pIRES-CEACAM6-4-1BBL質(zhì)粒減毒沙門氏菌構(gòu)建及功能鑒定
　　目的:構(gòu)建含pIRES-CEACAM6-4-1BBL質(zhì)粒減毒沙門氏菌。
　　方法:將

3、質(zhì)粒轉(zhuǎn)入鼠傷寒沙門氏菌(LB5000)進行甲基化,利用修飾后重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化終宿主菌SL3261,篩選后挑取單克隆擴增進行抽提質(zhì)粒和PCR鑒定。
　　結(jié)果:導(dǎo)入質(zhì)粒的SL3261經(jīng)抽提質(zhì)粒PCR電泳后獲得了同原轉(zhuǎn)化質(zhì)粒相同大小的目的條帶。
　　結(jié)論:成功構(gòu)建了含大鼠4-1BBL和CEACAM6基因的真核表達質(zhì)粒的SL3261疫苗菌。
　　第三部分:含pIRES-CEACAM6-4-1BBL質(zhì)粒減毒沙門氏菌對大鼠大腸癌生長的

4、影響
　　目的:探討減毒沙門氏菌為載體的CEACAM6聯(lián)合4-1BBL基因疫苗對荷瘤大鼠免疫系統(tǒng)的影響及治療大腸癌可行性。
　　方法:利用1,2-二甲肼連續(xù)18周皮下注射建立大鼠大腸癌模型,第8w、第10w和第12w及第16w根據(jù)分組灌服四次含質(zhì)粒減毒沙門氏菌,18周處死大鼠,解剖并觀察成瘤數(shù)量并進行Dukes分期評判;流式細胞儀檢測外周血和和脾臟中細胞表型并利用PHA刺激脾細胞分泌IFN-γ水平,RT-PCR檢測脾臟細胞中

5、真核表達載體CMV的轉(zhuǎn)錄。
　　結(jié)果:對照組平均成瘤數(shù)為11.7±2.1個,明顯高于pIRES-CEACAM6/SL3261的5.0±1.4,pIRES-4-1BBL/SL3261的5.7±1.2, pIRES-CEACAM6-4-1BBL/SL3261的4.3±1.4,其中以pIRES-CEACAM6-4-1BBL/SL3261組最為明顯,外周血和脾臟細胞表型檢測顯示活化T細胞較其它荷瘤組明顯增高(P<0.05),脾細胞PHA刺