減毒沙門氏菌為載體的CEACAM6聯(lián)合4-1BBL基因疫苗對大鼠腸癌生長的影響及機(jī)制研究.pdf

1、第一部分：含pIRES-CEACAM6-4-1BBL質(zhì)粒減毒沙門氏菌對大鼠大腸癌生長的影響
　　目的：研究減毒沙門氏菌（SL3261）為載體的CEACAM6聯(lián)合4-1BBL基因疫苗對實驗性大腸癌的抑制作用。
　　方法：實驗大鼠隨機(jī)分四組，每組6只，連續(xù)18周皮下注射1,2-二甲肼以建立大鼠大腸癌模型，同時于第8、10、12及14周每組分別灌服pIRES/SL3261、 pIRES-CEACAM6/SL3261、 pIRES-

2、4-1BBL/SL3261、pIRES-CEACAM6-4-1BBL/SL3261減毒沙門氏菌疫苗，濃度為109/ml的細(xì)菌2ml，第18周處死荷瘤大鼠，解剖并觀察大鼠大腸成瘤數(shù)量，收集大鼠大腸及脾臟組織，病理HE染色并評判腸道腫瘤Dukes分期，RT-PCR檢測大鼠脾臟細(xì)胞CMV基因。
　　結(jié)果：pIRES/SL3261空質(zhì)粒組平均成瘤數(shù)為11.7±2.1個，明顯多于pIRES-4-1BBL/SL3261組（5.7±1.2個），

3、pIRES-CEACAM6//SL3261組（5.0±1.4個），pIRES-CEACAM64-1BBL/SL3261組（4.3±1.4個）；Dukes分期分析，pIRES-CEACAM6-4-1BBL/SL3261組5只為A期，1只為B-C期；pIRES-4-1BBL/SL3261組中3只為A期，3只為B-C期；pIRES-CEACAM6/SL3261中1只為A期，5只為B-C期；pIRES/SL3261組中4只為B-C期，2只為D期

4、。RT-PCR檢測各組脾臟均有CMV基因表達(dá)。
　　結(jié)論：各組疫苗菌可以將外源基因有效轉(zhuǎn)錄至大鼠體內(nèi)并表達(dá)相關(guān)蛋白，含外源基因的疫苗菌均能抑制實驗性大腸癌的生長，以含雙基因疫苗菌的抑癌作用最強(qiáng)。
　　第二部分：含pIRES-CEACAM6-4-1BBL質(zhì)粒減毒沙門氏菌抑制大鼠大腸癌的機(jī)制研究——腫瘤局部免疫反應(yīng)
　　目的：通過研究腫瘤組織內(nèi)局部免疫反應(yīng)分析雙基因疫苗抑制腫瘤生長機(jī)制。
　　方法：采用免疫組織化學(xué)

5、SP法檢測四組大腸腫瘤組織的CD3、CD4、CD8、CD56、CD45RO、Foxp3、CEACAM6、IL-4、IL-17并分別評測各組指標(biāo)表達(dá)分值。
　　結(jié)果：與pIRES-CEACAM6-4-1BBL/SL3261組CD3、CD8+、CD56+、CD45RO表達(dá)明顯增高(P<0.05)，而 IL-4、IL-17和 FOXP3表達(dá)明顯下調(diào)(P<0.05)，另外，pIRES-CEACAM6/SL3261組CD45RO表達(dá)較pIR

6、ES/SL3261組明顯增高(P<0.05)。
　　結(jié)論：含有CEACAM6和4-1BBL雙基因的重組減毒沙門氏菌可能通過提高CD3+CD8+T細(xì)胞和NK細(xì)胞的浸潤,減少Foxp3細(xì)胞表達(dá)，促進(jìn)Th1極化，抑制Th2及Th17極化，誘導(dǎo)特異與非特異性免疫，并打破免疫抑制微環(huán)境的機(jī)制來抑制腸道腫瘤。
　　第三部分：含pIRES-CEACAM6-4-1BBL質(zhì)粒減毒沙門氏菌抑制大鼠大腸癌的機(jī)制研究——全身免疫反應(yīng)
　　目的

7、：通過研究脾臟組織免疫學(xué)指標(biāo)分析雙基因疫苗抑制腫瘤生長的機(jī)制。
　　方法：采用免疫組織化學(xué)SP法檢測四組大腸腫瘤組織的IFN-γ、CD3、CD4、CD8、CD56、Foxp3、IL-4、IL-17并分別評測各組指標(biāo)表達(dá)分值。
　　結(jié)果：與pIRES/SL3261組相比，pIRES-4-1BBL/SL3261組與pIRES-CEACAM6-4-1BBL/SL3261組IFN-γ、CD3、CD8+、CD56+表達(dá)明顯增高(P<0