RNA干擾her-2基因對骨肉瘤細胞血管生成相關因子VEGF-A、IL-8表達的影響.pdf

1、目的：初步探討shRNA沉默her-2基因對人骨肉瘤細胞株saos-2中血管生成相關因子VEGF-A和IL-8表達的影響及意義。
　　方法：構建her-2 shRNA重組表達載體，采用脂質體介導法轉染至人骨肉瘤細胞株saos-2，并經(jīng)G418篩選出穩(wěn)定轉染的細胞株，同時設不轉染的空白對照組和轉染陰性載體的shNC組;采用倒置熒光顯微鏡及流式細胞術對轉染效果進行評價;采用RT-PCR、Western blot檢測轉染前后her-2

2、mRNA和蛋白表達水平，評估抑制效果;RT-PCR檢測轉染前后VEGF-A和IL-8基因mRNA的轉錄水平;ELISA法檢測轉染前后細胞培養(yǎng)上清液中VEGF-A和IL-8的蛋白分泌水平。
　　結果：經(jīng)測序證實重組質粒her-2-shRNA構建成功，并成功將her-2-shRNA穩(wěn)定轉染至saos-2細胞中。構建獲得的her-2 shRNA重組質粒能顯著抑制her-2基因的表達，其對her-2 mRNA的轉錄和蛋白表達的抑制率分別為

3、63.05％和62.59％; RT-PCR、ELISA檢測結果顯示，相對于空白對照組和shNC陰性對照組，her-2 shRNA組VEGF-A、IL-8基因的mRNA的表達水平及蛋白分泌水平顯著下調（P＜0.01）。
　　結論：her-2-shRNA可顯著下調her-2基因在人骨肉瘤saos-2細胞中的表達水平，并能抑制VEGF-A、IL-8基因mRNA的轉錄和蛋白分泌水平;her-2基因參與了人骨肉瘤細胞VEGF-A、IL-8的