DNA甲基嘌呤糖苷酶MPG與p53的相互作用及對(duì)細(xì)胞周期相關(guān)基因的調(diào)控研究.pdf

1、抑癌基因p53是人類腫瘤中最常見的突變基因之一，大約在50％腫瘤中可以檢測(cè)到p53的突變。p53蛋白作為序列特異性轉(zhuǎn)錄因子，能通過調(diào)節(jié)大量靶基因的表達(dá)介導(dǎo)不同的下游功能，參與細(xì)胞周期阻滯、凋亡、老化和DNA損傷修復(fù)等諸多細(xì)胞事件。在非刺激條件下，p53通過快速的蛋白酶體途徑降解維持極低的表達(dá)水平。當(dāng)細(xì)胞受到刺激時(shí)，p53表達(dá)被穩(wěn)定并從抑制狀態(tài)釋放。這種活化主要通過兩種方式實(shí)現(xiàn)：(1)翻譯后修飾;(2)與不同蛋白發(fā)生相互作用。在以往的研究

2、中，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)部分蛋白在不同的條件下，通過與p53發(fā)生相互作用從而選擇性調(diào)控p53下游靶基因的表達(dá)。但是，由p53介導(dǎo)的細(xì)胞周期負(fù)調(diào)控機(jī)制并不清楚。
　　 為了尋找p53新的調(diào)控分子，我們利用高通量的蛋白芯片篩選新的p53相互作用蛋白。發(fā)現(xiàn)MPG（3-methyladenineglycosylase）能在腫瘤細(xì)胞中直接與p53相互作用并選擇性抑制p53介導(dǎo)的細(xì)胞周期阻滯。
　　 MPG是DNA堿基切除修復(fù)途徑(baseex

3、cisionrepair,BER)中的關(guān)鍵限速酶。當(dāng)細(xì)胞在自身代謝和受到外界損傷性刺激，產(chǎn)生堿基損傷時(shí)，MPG能識(shí)別多種損傷堿基，與其結(jié)合、切除，產(chǎn)生AP位點(diǎn)，啟動(dòng)BER，維持基因組的穩(wěn)定性。在腫瘤治療中常用的烷化劑產(chǎn)生的DNA損傷是MPG識(shí)別的主要底物。
　　 我們的研究發(fā)現(xiàn)，MPG的N端34-79位氨基酸（該區(qū)域與MPG的糖苷酶活性無關(guān)）能與野生型p53的DNA結(jié)合區(qū)直接結(jié)合，特異性抑制p53介導(dǎo)的細(xì)胞周期阻滯，但對(duì)p53介

4、導(dǎo)的細(xì)胞凋亡沒有影響。在p53野生型的腫瘤細(xì)胞中，給予烷化劑刺激，能特異的使MPG與p53相互作用解離，MPG對(duì)p53的抑制作用消失，轉(zhuǎn)而主要發(fā)揮損傷堿基的修復(fù)功能，從而降低這些腫瘤細(xì)胞對(duì)烷化劑的敏感性。相反，在p53突變型的腫瘤細(xì)胞中，烷化劑造成的損傷難以完全修復(fù)，對(duì)細(xì)胞的殺傷效應(yīng)高于p53野生型細(xì)胞。因此，MPG通過與p53的結(jié)合和解離，協(xié)調(diào)了自身糖苷酶活性依賴和非糖苷酶活性在DNA損傷修復(fù)中的作用。在乳腺癌，肺癌和結(jié)腸癌中，MPG