青蒿琥酯對(duì)K562細(xì)胞端粒酶活性的影響及凋亡的作用.pdf

1、廣東醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文青蒿琥酯對(duì)K562細(xì)胞端粒酶活性的影響及凋亡的作用姓名：葉啟翔申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：兒科學(xué)指導(dǎo)教師：陸羨20070501青蒿琥酯對(duì)K 5 6 2 細(xì)胞端粒酶活性的影響及凋亡的作用中文摘要【目的】青蒿琥酯( a r t e s u n a t e ，A I t T ) 化學(xué)名為二氫青蒿素．1 ，2 ．a(chǎn) ．琥珀酸單酯，分子量3 8 4 ，是青蒿素的衍生物之一。目前發(fā)現(xiàn)其對(duì)多種癌細(xì)胞株有明顯殺傷作用，其中自血病及結(jié)腸

2、癌細(xì)胞最為敏感，而對(duì)人體正常細(xì)胞作用輕微。其作用機(jī)制可能與誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，阻滯其細(xì)胞周期和抗腫瘤血管生成有關(guān)，確切的機(jī)制尚不十分清楚。端粒酶( t e l o m e r a s e ) 是一種特殊的逆轉(zhuǎn)錄酶，端粒酶的活化可以防止D N A 復(fù)制造成的端?？s短，使端粒長(zhǎng)度得以穩(wěn)定，從而使細(xì)胞獲得無(wú)限增殖能力成為永生細(xì)胞。而獲得永生性是細(xì)胞惡變的關(guān)鍵步驟。端粒酶活性的增強(qiáng)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。K 5 6 2 細(xì)胞為強(qiáng)端粒酶表達(dá)細(xì)胞

3、，是端粒酶研究的較理想模型。本研究擬觀察青蒿琥酯對(duì)人急性紅白血病細(xì)胞株K 5 6 2 細(xì)胞的增殖、細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡作用，并探討其與端粒酶活性的關(guān)系。【方法】( 1 ) 體外培養(yǎng)白血病細(xì)胞株K 5 6 2 細(xì)胞，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)研究．( 2 ) 應(yīng)用M T T 法、細(xì)胞形態(tài)學(xué)法觀察青蒿琥酯對(duì)體外培養(yǎng)的K 5 6 2 細(xì)胞的增殖抑制作用，找出最佳藥物作用濃度及作用時(shí)間，并設(shè)不加青蒿琥酯組作為對(duì)照組．( 3 ) 采用A n n e

4、 x i nV - E G F P 及P I 染色在流式細(xì)胞儀上檢測(cè)不同濃度的青蒿琥酯作用于體外培養(yǎng)K 5 6 2 細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期的變化。( 4 ) 應(yīng)用1 1 l A P —P C R —E L I S A 檢測(cè)法檢測(cè)不同濃度的青蒿琥酯對(duì)體外培養(yǎng)K 5 6 2 細(xì)胞端粒酶活性的變化?！窘Y(jié)果】( 1 ) 在青蒿琥酯終濃度為6 ．2 5 t t g ／m l 、1 2 ．5 t t g ／m l 、2 5 t t g ／n i l 、