類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎外周血破骨細(xì)胞活性研究.pdf

1、第一部分類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎外周血破骨細(xì)胞活性的研究
　　 目的：研究類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)患者外周血破骨細(xì)胞前體細(xì)胞(OCP)分化能力及血清腫瘤壞死因子α(TNF-α)水平。
　　 方法：取7例RA患者和9名健康對(duì)照的外周血，分離外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)，采用RANKL和M-CSF體外誘導(dǎo)培養(yǎng)破骨細(xì)胞(OC)。對(duì)培養(yǎng)14天后的細(xì)胞進(jìn)行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色，計(jì)數(shù)TRAP染色陽性、胞核≥3個(gè)的細(xì)胞(定義為OC)。

2、骨吸收實(shí)驗(yàn)考察OC的功能。運(yùn)用ELISA方法檢測(cè)15例RA患者和9名健康對(duì)照血清TNF-α水平。對(duì)RA患者OC數(shù)量和TNF-α水平與疾病活動(dòng)性指標(biāo)包括紅細(xì)胞沉降率(ESR)、C反應(yīng)蛋白(CRP)進(jìn)行相關(guān)分析。
　　 結(jié)果：(1)RA患者外周血生成OC數(shù)量顯著高于健康對(duì)照，分別為27.8±10.8個(gè)/10個(gè)視野(-x±SD)和14.4±6.1個(gè)/10個(gè)視野(P＜0.05)；(2)RA患者TNF-α水平顯著高于健康對(duì)組，分別為18.

3、8±5.2 pg/ml和9.5±3.0 pg/ml(P＜0.05)；(3)RA患者OC數(shù)量與ESR正相關(guān)(r=0.912，p=0.000)，與CRP無顯著相關(guān)性；(4)RA患者外周血TNF-α水平與ESR顯著正相關(guān)(r=0.936，p=0.000)，與CRP無顯著相關(guān)性；(5)RA患者外周血TNF-α水平與OC數(shù)量顯著正相關(guān)(r=0.913，p=0.000)。
　　 結(jié)論：RA患者外周血OCP數(shù)量顯著增高，血清TNF-α水平顯著

4、增高，二者可能是造成炎癥局部OC活性增高進(jìn)而引起關(guān)節(jié)骨質(zhì)破壞的機(jī)制。
　　 第二部分甲氨蝶呤對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎外周血破骨細(xì)胞活性的影響
　　 目的：研究甲氨喋呤(MTX)對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)外周血破骨細(xì)胞前體細(xì)胞(OCP)分化能力及外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)分泌TNF-α的影響。
　　 方法：采集3例健康志愿者者PBMCs，在含不同濃度(0 nM、1 nM、10 nM、102nM、103nM和104nM)的MT

5、X的培養(yǎng)液中培養(yǎng)24、48、72小時(shí)，采用CCK8方法檢測(cè)細(xì)胞活力。采用RANKL和M-CSF誘導(dǎo)PBMCs使其向OC分化，在培養(yǎng)液中加不同濃度(1 nM、10 nM和102nM)MTX，14天后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行TRAP染色，計(jì)數(shù)TRAP染色陽性、胞核≥3個(gè)的細(xì)胞(定義為OC)。收集48小時(shí)的培養(yǎng)上清液，運(yùn)用ELISA方法檢測(cè)其TNF-α水平。
　　 結(jié)果：(1)用CCK8檢測(cè)顯示較低濃度(1 nM、10 nM和102nM)MTX對(duì)細(xì)

6、胞活力影響不大，與對(duì)照組(0 nM)無顯著差別。較高濃度MTX(103 nM和104nM)使細(xì)胞活力顯著降低；(2)10 nM和102nM的MTX加入OC培養(yǎng)體系，產(chǎn)生OC的數(shù)量顯著低于對(duì)照組，分別為26.3±7.6(-x±SD)、13.6±6.0和35.8±6.6個(gè)/10個(gè)視野(P＜0.05)；(3)10 nM和102nM的MTX加入OC培養(yǎng)體系，培養(yǎng)上清液中的TNF-α水平也較對(duì)照組(0 nM)顯著降低，分別為45.3±4.7、39