促性腺激素釋放激素在飼餌性高脂妊娠大鼠胰腺和腸道中表達的研究.pdf

1、多項臨床研究證實促性腺激素釋放激素（gonadotropin-releasing hormone；GnRH）與糖代謝關(guān)系密切，同時妊娠期母體內(nèi)的GnRH發(fā)生明顯變化，且有研究顯示接受長效GnRH類似物治療的體外受孕婦女中妊娠糖尿病的發(fā)病率顯著增高。結(jié)合本課題組既往發(fā)現(xiàn)胰腺外分泌部和腸道存在GnRH及其受體，提示胰腺和腸道的GnRH可能在妊娠期生理性胰島素抵抗或妊娠糖尿病中起重要作用。此研究擬從腸道激素的角度探討GnRH在高脂妊娠狀態(tài)時的

2、變化，以期闡明胰腸系統(tǒng)的GnRH在妊娠糖尿病發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　目的：
　　1.明確高血脂妊娠狀態(tài)下，胰腺和不同腸段GnRH的表達水平。
　　2.了解胰腺和不同腸段GnRH的變化與胰高血糖素、胰島素及糖代謝變化之間的相關(guān)性。
　　方法：
　　1.采用免疫組織化學(xué)方法觀察了高血脂妊娠大鼠胰腺GnRH及其受體蛋白的表達及分布特點。
　　2.采用放免法測定高血脂妊娠大鼠及正常妊娠大鼠OGTT和進餐試驗各

3、點胰島素水平；并對胰島素敏感性進行評估。
　　3.采用實時熒光定量PCR方法，觀察高血脂妊娠大鼠及正常妊娠大鼠GnRH及其受體、胰高血糖素原和GLP-1受體的mRNA在胰腺和不同腸段表達的差異。
　　4.采用ELISA法測定高血脂妊娠大鼠及正常妊娠大鼠GnRH在胰腺蛋白質(zhì)水平的表達。
　　5.采用WesternBlot測定高血脂妊娠大鼠及正常妊娠大鼠胰高血糖素在胰腺蛋白質(zhì)水平的表達。
　　結(jié)果：
　　1.胰

4、腺GnRH及其受體、胰高血糖素、GLP-1受體表達及GnRH與高血糖素的相關(guān)性研究
　　A.OGTT結(jié)果顯示各組大鼠的血糖最高點均在服糖后30min，Control組胰島素分泌最高點在15min，而Hch組、Gestation組和Hch+Gestation組胰島素分泌高峰為30min；說明高脂和妊娠兩種狀態(tài)均導(dǎo)致胰島素高峰分泌延遲。Gestation組空腹胰島素高于Control組（21.68±2.55vs14.35±0.86mI

5、U/L，P<0.05），而胰島素AUC等與Control組無區(qū)別，說明妊娠中期胰島素抵抗以基礎(chǔ)胰島素增高為主。Hch組胰島素AUC高于Control組（230.25±13.19vs129.71±11.33mIU/L,P<0.05）；ISI低于Control組（2.84±0.52vs4.95±0.56,P<0.01），說明高脂血癥時存在胰島素抵抗。Hch+Gestation組的空腹胰島素高于Control組（25.76±3.31vs14.

6、35±0.86mIU/L，P<0.01），而與Hch組的空腹胰島素相比無差異，其血糖AUC低于Hch組（29.01±1.40vs35.49±2.06mmol/L，P<0.01）；同時Hch+Gestation組的胰島素AUC高于Control組（204.60±27.95vs129.71±11.33mIU/L，P<0.05），ISI低于Control組（2.21±0.32vs4.95±0.56,P<0.01）和Gestation組（2.2

7、1±0.32vs4.64±0.90,P<0.01）；提示高脂妊娠中期已存在高胰島素血癥和胰島素抵抗。
　　B.胰腺GnRH組織化學(xué)染色顯示Hch+Gestation組胰腺細胞GnRH陽性率高于Control組（P<0.01）。
　　C.Hch+Gestation組胰腺GnRHmRNA相對表達量高于Control組1.76倍（P<0.01），高于Hch組1.4倍（P<0.05），高于Gestation組1.53倍（P<0.01

8、）。Hch+Gestation組胰腺GnRH蛋白質(zhì)表達高于Control組（7.06±0.28vs5.40±0.41mg/L，P<0.05），Gestation組（7.06±0.28vs5.95±0.38mg/L，P<0.05）和Hch組（7.06±0.28vs5.97±0.30mg/L，P<0.05）。
　　D.Hch+Gestation組胰腺PGmRNA相對表達量高于Control組1.77倍（P<0.01），高于Hch組1.

9、54倍（P=0.01），同時Gestation組PGmRNA相對表達量高于Control組1.46倍（P<0.05）。Hch+Gestation組胰高血糖素蛋白質(zhì)表達量高于Control組3.44倍（P<0.01），高于Hch組2.9倍（P<0.01），與Gestation組表達量無差異；Gestation組胰高血糖素高于Control組2.57倍（P<0.01）。
　　E.大鼠胰腺GnRHmRNA相對表達量與PGmRNA相對表達

10、量呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r=0.521，P=0.01。
　　2.腸道GnRHmRNA的表達及其與PGmRNA的相關(guān)性研究
　　A.進餐試驗提示進餐后各組大鼠血糖最高點和胰島素分泌最高點均在60min；說明進餐試驗時胰島素高峰晚于OGTT。
　　B.Hch+Gestation組空腸GnRHmRNA相對表達量高于Control組2.68倍（P<0.01），高于Hch組1.49倍（P<0.05），高于Gestation組1.45

11、倍（P<0.05）；同時Hch組高于Control組1.86倍（P<0.05）。而其PGmRNA相對表達量高于Control組1.78倍（P<0.05），高于Gestation組1.53倍（P<0.05），同時Hch組高于Control組1.52倍（P<0.05）。Gestation組空腸GnRHRmRNA相對表達量高于Control組1.85倍（P<0.05)。各組空腸GLP-1RmRNA相對表達量均未見差異。大鼠空腸GnRHmRNA

12、相對表達量與PGmRNA相對表達量呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r=0.699，P<0.01。
　　C.Hch+Gestation組回腸GnRHmRNA相對表達量高于Control組2.18倍（P<0.05）。各組間回腸PGmRNA相對表達量均未見差異。大鼠空腸GnRHmRNA相對表達量與PGmRNA相對表達量呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r=0.755，P<0.01。
　　D.各組間結(jié)腸GnRHmRNA相對表達量均未見差異。Hch+Gestati

13、on組PGmRNA相對表達量高于Control組2.07倍（P<0.05），Gestation組高于Control組2.06倍（P<0.05）；Hch組高于Control組2.11倍（P<0.05）。大鼠結(jié)腸GnRHmRNA相對表達量與PGmRNA相對表達量呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r=0.513，P<0.01。
　　結(jié)論：
　　高脂妊娠大鼠的胰腺GnRH增加，同時其胰島素抵抗較高脂大鼠和正常妊娠大鼠加重，盡管這兩種變化的關(guān)系和機制