中國(guó)北方漢族人群維生素D與支氣管哮喘易感性及其相關(guān)表型的研究.pdf

1、背景:支氣管哮喘作為一種典型的復(fù)雜性疾病,遺傳和環(huán)境因素均可影響其發(fā)病和表型。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn),日照時(shí)間的減少與哮喘發(fā)病之間存在關(guān)聯(lián)性,而維生素D在其中起重要作用。另有研究表明維生素D代謝通路中的某些成分與哮喘和過(guò)敏的發(fā)病有關(guān),而維生素D代謝通路相關(guān)基因多態(tài)性與哮喘發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)聯(lián)。主要機(jī)制可能包括維生素D和環(huán)境危險(xiǎn)因素等共同作用導(dǎo)致免疫系統(tǒng)的失衡,以及維生素D影響胚胎肺發(fā)育等。因此,深入研究維生素D及代謝產(chǎn)物在哮喘發(fā)病及其表型中所起的作用

2、及相關(guān)機(jī)制,有助于進(jìn)一步闡明支氣管哮喘的發(fā)病機(jī)制,從而為哮喘的預(yù)防和治療提供新的途徑。
　　 目的:1.了解中國(guó)北方漢族成人哮喘患者的血清維生素D水平。2.探討血清25-(OH)-VD水平與肺功能和血清總IgE之間的關(guān)聯(lián)性。3.探討中國(guó)北方漢族人群中維生素D代謝通路中3個(gè)重要的相關(guān)基因多態(tài)性,即維生素D受體基因(VDR),25-羥化酶基因(CYP2RJ)以及維生素D結(jié)合蛋白基因(GC)與哮喘發(fā)病及哮喘相關(guān)表型之間的關(guān)聯(lián)性。

3、>　　 方法:
　　 1.哮喘患者的診斷,受試者的入組,肺功能的測(cè)定(包括FEV1絕對(duì)值,FEV1％預(yù)計(jì)值和FEV1/FVC等指標(biāo)),血樣的收集和血清總IgE的測(cè)定。
　　 2.血清的分離和基因組DNA的提取。
　　 3.在435名新近診斷的中國(guó)北方成人哮喘患者中,采用橫斷面調(diào)查方法,用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定其血清25-(OH)-VD濃度。然后分析血清25-(OH)-VD水平與肺功能和血清總IgE之間的關(guān)聯(lián)性。

4、r>　　 4.采用病例-對(duì)照研究方法,入組哮喘患者467名和健康對(duì)照者288名,研究維生素D代謝通路中3個(gè)重要的相關(guān)基因(VDR,CYP2R1和GC基因)多態(tài)性。對(duì)VDR基因所有的8個(gè)編碼外顯子和CYP2R1基因所有的5個(gè)外顯子,采取PCR擴(kuò)增結(jié)合直接測(cè)序法來(lái)探測(cè)有無(wú)新的基因變異；對(duì)GC基因兩個(gè)常見的已知的SNPs(rs4588和rs7041)位點(diǎn),運(yùn)用PCR-RFLP方法進(jìn)行基因分型。然后分析這些多態(tài)性與哮喘發(fā)病及哮喘相關(guān)表型之間的

5、關(guān)聯(lián)性。
　　 結(jié)果:
　　 1.維生素D缺乏在中國(guó)北方漢族成人哮喘患者樣本中是一個(gè)普遍現(xiàn)象,387名(占89.0％)患者的血清25-(OH)-VD濃度<50nmol/L。
　　 2.血清25-(OH)-VD濃度與肺功能FEV1％預(yù)計(jì)值呈正相關(guān)(P=0.02,r=0.12),在對(duì)受試者年齡,性別,BMI,吸煙狀況,癥狀持續(xù)時(shí)間以及血樣收集時(shí)間進(jìn)行調(diào)整后,血清25-(OH)-VD濃度與肺功能指標(biāo)(包括FEV1絕對(duì)值

6、,FEV1％預(yù)計(jì)值和FEV1/FVC)呈顯著正相關(guān)。在最大和最小血清25-(OH)-VD濃度四分位區(qū)間的FEV1<75％預(yù)計(jì)值項(xiàng)目比較中,調(diào)整后的OR值為0.50(95％可信區(qū)間0.26-0.96；P=0.007)；而這兩個(gè)區(qū)間FEV1/FVC<0.75項(xiàng)目的比較中,調(diào)整后的OR值為0.44(95％可信區(qū)間0.20-0.95；P=0.007)。但是,血清25-(OH)-VD濃度與血清總IgE或外周血嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)之間不存在關(guān)聯(lián)性。

7、r>　　 3.VDR和CYP2R1基因所有編碼的外顯子進(jìn)行測(cè)序,序列比對(duì)分析后發(fā)現(xiàn)了兩個(gè)已知的SNPs位點(diǎn),即VDR/SNP(rs2228570；FokⅠ)和CYP2R1/SNP(rs12794714)。統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)這兩個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)與哮喘發(fā)病及哮喘相關(guān)表型(如外周血嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù),血清總IgE或肺功能)之間不存在關(guān)聯(lián)性。
　　 4.GC基因的第11個(gè)外顯子上兩個(gè)常見的SNPs(rs4588和rs7041)主要產(chǎn)生三種基因型G

8、c1/1,Gc1/2和Gc2/2。相對(duì)于Gc1/1基因型而言,Gc2/2基因型與哮喘發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)之間有明顯的關(guān)聯(lián)性(OR=13.13,95％可信區(qū)間2.42-7.13,P=0.001)。但是未發(fā)現(xiàn)其與外周血嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù),血清總IgE,肺功能以及血清25-(OH)-VD濃度之間的關(guān)聯(lián)性。
　　 結(jié)論:1.維生素D缺乏在中國(guó)北方漢族成人哮喘患者樣本中是一個(gè)普遍現(xiàn)象,血清25-(OH)-VD濃度與肺功能呈正相關(guān)。2.在中國(guó)北方漢族人群