阿霉素坐骨神經(jīng)內(nèi)給藥對(duì)大鼠背根節(jié)各型神經(jīng)元影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、阿霉素是一種具有自發(fā)熒光特性的葸類(lèi)抗生素類(lèi)廣譜抗腫瘤藥物，具有明顯的神經(jīng)毒性。背根神經(jīng)節(jié)是軀干、四肢痛覺(jué)的初級(jí)傳入神經(jīng)元，是機(jī)體內(nèi)外環(huán)境與脊髓連接的紐帶，具有傳輸和調(diào)節(jié)機(jī)體的各種感覺(jué)，接受和傳遞各種傷害性感受的功能。成年大鼠背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元亦可按胞體大小分3類(lèi)，分為大中小三種類(lèi)型，其中的中、小型細(xì)胞傳遞的信息與痛覺(jué)關(guān)系密切。 目的：本實(shí)驗(yàn)是在以往實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，通過(guò)建立外周神經(jīng)套管動(dòng)物模型，探索大鼠阿霉素坐骨神經(jīng)給藥后，不同時(shí)間段

2、的背根神經(jīng)節(jié)各型神經(jīng)細(xì)胞發(fā)生的形態(tài)學(xué)變化是否有差別，進(jìn)一步了解阿霉素對(duì)背根神經(jīng)節(jié)的神經(jīng)毒性是否具有高選擇性、及時(shí)間和劑量相關(guān)性，為阿霉素的化學(xué)性感覺(jué)神經(jīng)節(jié)切除術(shù)的臨床應(yīng)用提供新的理論依據(jù)。 方法：成年SD大鼠40只，體重180～220g，隨機(jī)分為2組，為0.33％阿霉素組和1.0％阿霉素組。全麻下暴露大鼠雙側(cè)坐骨神經(jīng)，然后銳性橫斷坐骨神經(jīng)，將右側(cè)神經(jīng)近心端置入乳硅膠管內(nèi)，固定、縫扎，用微量進(jìn)樣器分別向管內(nèi)注入0.33％和1.0％

3、阿霉素溶液20μl作為試驗(yàn)側(cè)，左側(cè)坐骨神經(jīng)同樣手術(shù)，注入等量生理鹽水作為對(duì)照側(cè)。按4d、1w、2w、4w、6w的時(shí)間順序處死動(dòng)物取雙側(cè)L5背根神經(jīng)節(jié)標(biāo)本，制作石蠟切片，HE染色及甲苯胺藍(lán)染色，于光鏡下觀察各型背根節(jié)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化，對(duì)各型節(jié)細(xì)胞中出現(xiàn)的異常神經(jīng)元分別計(jì)數(shù)。選擇1.0％阿霉素組實(shí)驗(yàn)側(cè)L5神經(jīng)節(jié)標(biāo)本制作超薄切片，電鏡下分別觀察各型背根節(jié)細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)變化。 結(jié)果：1.0.33％阿霉素組1w的實(shí)驗(yàn)側(cè)L5背根節(jié)光鏡下可見(jiàn)

4、各型神經(jīng)元均出現(xiàn)程度不同的細(xì)胞水腫，“氣球樣變”的輕微變性改變。除此之外，其后各時(shí)段各型神經(jīng)元形態(tài)學(xué)變化并無(wú)明顯進(jìn)展。2.1.0％阿霉素組1w注藥側(cè)L5背根節(jié)光鏡下各型神經(jīng)元均顯示細(xì)胞腫脹、變性；2w時(shí)均可見(jiàn)尼氏小體減少、消失；4w和8w后各型背根節(jié)細(xì)胞壞死、消失，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞增生。實(shí)驗(yàn)觀察期間各型神經(jīng)元光鏡結(jié)果未發(fā)現(xiàn)明顯差別。3.1.0％阿霉素組實(shí)驗(yàn)側(cè)L5背根節(jié)的小神經(jīng)元(平均直徑≤35μm)，在用藥后4d、1w、2w與對(duì)照側(cè)背根節(jié)細(xì)

5、胞形態(tài)有差別的神經(jīng)元數(shù)目顯著多于大神經(jīng)元(平均直徑＜35μm)的異常細(xì)胞數(shù)(p＜0.01)。4.1.0％阿霉素組注藥側(cè)L5背根節(jié)1w時(shí)電鏡下小神經(jīng)元出現(xiàn)線(xiàn)粒體腫脹，核膜彎曲不光滑；2w時(shí)顯示線(xiàn)粒體腫脹、嵴溶解，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)池樣擴(kuò)張；4w和6w時(shí)出現(xiàn)線(xiàn)粒體高度腫脹、崩解，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)減少，多聚核糖體解體，核膜不完整。大神經(jīng)元表現(xiàn)為：2w時(shí)顯示染色質(zhì)部分溶解，神經(jīng)絲異常聚集；4w和6w的改變相似，可見(jiàn)電子致密物聚集，核周質(zhì)出現(xiàn)空泡，細(xì)胞器消失等

6、現(xiàn)象。生理鹽水側(cè)背根節(jié)細(xì)胞形態(tài)在整個(gè)試驗(yàn)期間無(wú)明顯異常。 結(jié)論：1.當(dāng)將0.33％阿霉素20μl以坐骨神經(jīng)套管給藥時(shí)，大鼠各型背根節(jié)細(xì)胞均未發(fā)生顯著的退化性反應(yīng)。2.光鏡和電鏡下的阿霉素所致大鼠各型背根節(jié)神經(jīng)元隨時(shí)間順序發(fā)生的變性、壞死結(jié)果與阿霉素作為可逆行軸漿傳輸?shù)纳窠?jīng)毒性因子的作用機(jī)制相適應(yīng)，顯示有時(shí)間相關(guān)性。3.雖然光鏡下無(wú)法肉眼識(shí)別1.0％阿霉素20μl對(duì)大鼠DRG各型神經(jīng)元細(xì)胞影響的差別；但通過(guò)光鏡細(xì)胞計(jì)數(shù)和電鏡觀察結(jié)