GABA-GABRQ對HepG-2細(xì)胞增殖能力的影響.pdf

1、目的：研究γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid，GABA）對肝癌細(xì)胞株HepG-2細(xì)胞增殖能力及惡性表型的影響，繼而探討RNA干擾（RNA interference，RNAi）沉默GABRQ（GABAA家族θ亞單位）基因后，HepG-2細(xì)胞增殖能力的改變。 方法：用不同濃度的GABA與人肝癌細(xì)胞HepG-2作用后，經(jīng)四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）法測定細(xì)胞生長速度，檢測細(xì)胞倍增時間，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期的改變，軟瓊脂

2、細(xì)胞集落形成實驗和裸鼠成瘤實驗檢測細(xì)胞的惡性表型；用GABRQ基因小干擾RNA（siRNA）轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞HepG-2后，采用半定量PCR方法檢測GABRQ基因mRNA水平，分別采用MTT，F(xiàn)CM，平板克隆形成實驗和細(xì)胞劃痕實驗檢測HepG-2細(xì)胞的增殖和遷移能力。 結(jié)果：MTT實驗結(jié)果表明實驗組細(xì)胞的生長速度明顯快于對照組細(xì)胞，且呈劑量依賴性；細(xì)胞周期分布也發(fā)生改變，G1期細(xì)胞減少，S期細(xì)胞增多；對照組細(xì)胞和各濃度組細(xì)胞的平均倍

3、增時間分別為5.13、2.54、2.11、1.62、1.38、4.35天；軟瓊脂細(xì)胞集落形成率依次為3.8％，6.2％，8.1％，8.9％，9.1％，4.6％； Balb/c裸鼠成瘤實驗顯示，實驗組和對照組的腫瘤平均質(zhì)量依次為1.382g、0.285g，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.01）； RT-PCR檢測轉(zhuǎn)染si-mock和si-1 GABRQ、si-2 GABRQ、si-3 GABRQ、si-4 GABRQ細(xì)胞mRNA的表達(dá)水平，結(jié)果

4、發(fā)現(xiàn)僅HepG-2/si-lGABRQ組細(xì)胞未檢測到GABRQ mRNA；體外實驗表明與HepG-2/si-mock組相比較，HepG-2/si-lGABRQ組細(xì)胞生長速度下降，G1期細(xì)胞增多，S期細(xì)胞減少；細(xì)胞越過劃痕區(qū)的能力下降；平板克隆形成數(shù)減少（P<0.05）。HepG-2/si-mock組細(xì)胞經(jīng)GABA刺激后，增殖能力增強(qiáng)，而HepG-2/si-1組細(xì)胞經(jīng)GABA刺激后，增殖能力無顯著變化。 結(jié)論：GABA能促進(jìn)Hep