重組人腫瘤壞死因子α（rhTNFα）的鑒定、表達(dá)及大規(guī)模提取的研究.pdf

1、該論文是該實(shí)驗(yàn)室用大腸桿菌表達(dá)重組人腫瘤壞死因子的中試生產(chǎn)工藝的一部分.論文重點(diǎn)對重組人腫瘤壞死因子的基因鑒定、克隆表達(dá)，目標(biāo)蛋白的釋放和初提取進(jìn)行了研究.由于該實(shí)驗(yàn)室的E.ColiBL21菌種保存時(shí)間過長，需要對質(zhì)粒進(jìn)行鑒定.首先提取pTNF320質(zhì)粒，切下其中的TNFcDNA片段，插入到克隆載體pUC19上測序，根據(jù)測序結(jié)果翻譯到氨基酸序列，同文獻(xiàn)中的TNF氨基酸序列進(jìn)行了比較，兩者序列完全一致，表明此工程菌可用，然后將pTNF32

2、0質(zhì)粒轉(zhuǎn)化新鮮的宿主菌E.ColiBL21進(jìn)行目標(biāo)產(chǎn)物的表達(dá).另外，該實(shí)驗(yàn)針對珠磨破碎動(dòng)力學(xué)進(jìn)行了研究，分別考察了間歇破碎、連續(xù)破碎動(dòng)力學(xué)，研究了蛋白釋放率與細(xì)胞破碎之間的關(guān)系，比較了連續(xù)破碎、間歇破碎及超聲破碎的的破碎效果.論文還研究了高流量多循環(huán)對細(xì)胞破效果的影響，考察了不同操作條件下的能量利用率.最后根據(jù)TNF的耐溫特性，集成60℃熱變性除雜蛋白及隨后的硫銨沉淀，考察了不同組合集成路線對TNF初提取的影響，得出了一條最佳工藝路線.