抗人內皮細胞特異性分子-1單克隆抗體的制備及其特性鑒定和初步應用.pdf

1、目的研制抗人內皮細胞特異性分子-1(Endothelial cell specific molecule-1,ESM-1)單克隆抗體,并對其生物學特性進行鑒定;探討ESM-1蛋白在腫瘤標本中的表達.方法采用B淋巴細胞雜交瘤技術,以人ESM-1蛋白為抗原,免疫BALB/C小鼠,取脾細胞與SP2/0,經(jīng)PEG融合,在HAT選擇培養(yǎng)基中培養(yǎng)兩周,用ELISA方法鑒定陽性克隆、有限稀釋法篩選單克隆細胞株,并對其進行特性分析:分析染色體核型;用S

2、igma公司的鼠單抗定型Immunotype<'TM>試劑盒進行亞型分析;用Westen blot方法檢測單克隆抗體的特異性;用間接ELISA方法,測定了相對親和常數(shù);并通過免疫熒光鑒定ESM-1在內皮細胞ECV304中的表達.用免疫組織化學法檢測腎癌組織中ESM-1的變化,同時用HE染色觀察細胞結構.結果獲得了7株穩(wěn)定分泌抗人ESM-1的雜交瘤細胞株,其中3A7細胞株特異性尤為顯著,效價高達1:6000.其染色體數(shù)目為100條左右,所

3、分泌抗體亞型為IgG2b,親和常數(shù)為1.67×10<'4>L/mol,對內皮細胞中的ESM-1蛋白及細胞培養(yǎng)上清中的ESM-1均具有特異性識別,顯示高度特異性.并觀察到ESM-1主要分布在內皮細胞的細胞胞漿內.在腎組織中,ESM-1定位于血管內皮細胞,且腎癌標本中ESM-1陽性表達顯著高于正常腎組織.結論成功地研制了抗人ESM-1的單克隆抗體細胞株,免疫組化結果表明所獲單抗具有一定的特異性和實用性.抗體可用于人的正常組織和腫瘤組織的免疫