ARHI基因在卵巢腫瘤組織中的表達(dá)及組蛋白去乙酰化酶抑制劑對(duì)其影響的研究.pdf

1、目的：觀察印跡抑癌基因ras同源家族I(A ras homologue member I，ARHI)在卵巢腫瘤組織中的表達(dá)分布特點(diǎn)，并探討其與卵巢腫瘤的組織學(xué)分型和惡性腫瘤臨床分期的關(guān)系。同時(shí)利用組蛋白去乙?；敢种苿?histone deacetylaseinhibitors,HDACIs)干預(yù)卵巢癌細(xì)胞株的生長(zhǎng)，觀察細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率，探討HDACIs對(duì)卵巢癌細(xì)胞株中ARHI基因表達(dá)的影響。 方法 1、所取卵巢腫瘤組織均

2、為新鮮標(biāo)本，正常卵巢組織10例、卵巢良性腫瘤13例、卵巢交界性腫瘤5例、卵巢惡性腫瘤33例，取后置于-80℃保存。利用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)檢測(cè)ARHI的mRNA表達(dá)，分析比較ARHI基因表達(dá)與腫瘤良、惡性及卵巢惡性腫瘤臨床分期、腫瘤組織學(xué)分型的關(guān)系。 2、組蛋白去乙?；敢种苿?HDACIs)有效抑制細(xì)胞中組蛋白去乙酰

3、化酶，曲谷抑菌素(Trichostain A,TSA)是其中一種高效抑制劑。選取卵巢腫瘤四種細(xì)胞株：COCl為懸浮細(xì)胞，SKOV3、A2780、OC3為貼壁細(xì)胞，四種均屬卵巢腫瘤惡性程度較高的細(xì)胞系。采用四甲基偶氮唑藍(lán)MTT比色法檢測(cè)不同濃度TSA和順鉑對(duì)四種卵巢癌細(xì)胞系體外生長(zhǎng)的抑制作用。應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)卵巢癌細(xì)胞自然生長(zhǎng)組和藥物作用組中ARHI mRNA的表達(dá)水平。 結(jié)果 1、ARHI基因與卵巢惡性腫瘤病理

4、生物學(xué)特征的相關(guān)性研究。不同程度不同分型的卵巢腫瘤組織中ARHI基因表達(dá)存在不同的差異。 (1)正常卵巢組織中ARHI基因的表達(dá)陽(yáng)性率為100％(10/10)；13例卵巢良性腫瘤中10例表達(dá)陽(yáng)性(77％，10/13)，3例表達(dá)缺失(23％，3/13)。5例交界性腫瘤中3例ARHI表達(dá)為陽(yáng)性，2例表達(dá)缺失，缺失率為40％(2/5)。33例惡性腫瘤組織中僅有11例有表達(dá)，缺失率為67％(11/33)。 (2)ARHI基因的表

5、達(dá)與卵巢腫瘤的良、惡性有關(guān)，與卵巢惡性腫瘤的組織學(xué)分型無關(guān)(p>O.05)，與卵巢腫瘤臨床分期有關(guān)(pO.05)。其它三組進(jìn)行兩兩比較，無顯著差異(p>O.05)。ARHI基因mRNA表達(dá)水平

6、與卵巢癌臨床分期呈負(fù)相關(guān)(D0.05)，Ⅱ期與Ⅲ、Ⅳ期之間有顯著差別(p<0.05)，Ⅲ期與Ⅳ期間有顯著差別(p<0.05)。 2、TSA對(duì)卵巢癌細(xì)胞株生長(zhǎng)及ARHI表達(dá)的影響 (1)不同濃度TSA(100nmolFL、200nmol/L、300nmol/L、400nmol/L)和順鉑(10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、

7、80μmol/L、200μmol/L)作用不同時(shí)間后對(duì)四種細(xì)胞均有明顯抑制作用，隨著濃度時(shí)間增加，細(xì)胞受抑制程度明顯增強(qiáng)(pO.05)。順鉑(cisplatin，CDDP)對(duì)四種細(xì)胞均有明顯的抑制作用，與濃度時(shí)間成相關(guān)關(guān)系(p

8、用沒有顯著差別(p>O.05)。 (2)有效濃度TSA(250nmol/L)和順鉑(80μmol/L)作用48h后存活的卵巢癌細(xì)胞A2780、COCl、OC3中ARHI mRNA的表達(dá)與未加藥的空白對(duì)照組沒有差別，而SKOV3細(xì)胞TSA作用后ARHI的表達(dá)量明顯高于順鉑對(duì)照組和空白對(duì)照組。TSA作用后SKOV3細(xì)胞系中ARHI mRNA平均表達(dá)水平為0.087±0.01，順鉑作用后四種細(xì)胞系均沒有ARHI表達(dá)。 結(jié)

9、論： 1、ARHI/NOEY2基因在正常卵巢組織中表達(dá)，在卵巢腫瘤組織中有低表達(dá)或缺失。 2、ARHI基因在卵巢腫瘤不同組織學(xué)分型中表達(dá)無差異，但在不同腫瘤分期本文詳細(xì)研究了低碳鋼冷擠壓成形的摩擦潤(rùn)滑機(jī)理，從理論上分析了磷化-皂化膜的成膜機(jī)理、潤(rùn)滑機(jī)理以及影響成膜質(zhì)量的各種因素。同時(shí)利用金相顯微鏡、掃描電鏡、電子探針以及X射線衍射儀等試驗(yàn)手段對(duì)中溫鋅系磷化-皂化膜的表面形貌、截面形貌、組織結(jié)構(gòu)及成分進(jìn)行了實(shí)測(cè)分析，主

10、要發(fā)現(xiàn)： (1)中溫鋅系磷化膜主要以磷酸鋅(H膜)為主，并有少量磷酸鋅鐵(P膜)存在；磷化膜的表面有棒狀和球狀兩種形貌存在；磷化膜截面是層狀結(jié)構(gòu)，各層間間距略有不同；磷化膜層厚度約為20μm。 (2)經(jīng)過皂化后的磷化膜膜層分為磷酸鋅、硬脂酸鋅和硬脂酸鈉三層。最外層為硬脂酸鈉，呈棉絮狀結(jié)構(gòu)，次外層為硬脂酸鋅，最內(nèi)層為磷酸鋅。 (3)變形后還有殘留磷化-皂化膜的部位潤(rùn)滑效果良好。 (4)變形中工件表面各部位磷

11、化-皂化膜層的變形量不同。外側(cè)表面的磷化-皂化膜厚度變薄率從上而下先由小到大，再到??；內(nèi)側(cè)表面的磷化-皂化膜厚度變薄率從上而下逐漸變大。 (5)變形中各部位材料的變形量不同。上部材料變形量較小，沿高度尺寸向下，材料的變形量逐漸增大，達(dá)到工件的中部時(shí)(凹模出口部位)，材料的變形量達(dá)到最大，隨高度尺寸再往下時(shí)，材料的變形量又逐漸變小。 (6)成形工件中部(凹模出口部位)摩擦較大，潤(rùn)滑效果不好，極易出現(xiàn)劃痕。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果