SSEA-3，SSEA-4在乳腺癌中表達的實驗研究.pdf

1、背景與目的:
　　 近年來隨著干細胞認識的深入及生物實驗技術的進步,干細胞研究已幾乎涉及到所有的生命科學和生物醫(yī)藥學等領域。胚胎干細胞更是由于其廣闊的應用前景而倍受科學界的關注。階段特異性胚胎抗原(stage specific embryonicantigen,SSEA)因為其在胚胎干細胞的分離、鑒定中的普遍應用也引起人們的廣泛關注。由于在最初發(fā)現時,SSEA是特異性地表達于哺乳動物胚胎發(fā)育的特定階段而得名。目前,這些抗原都是通

2、過相應的單克隆抗體作為探針鑒別發(fā)現的,并且按照它們被發(fā)現的先后順序將其依次命名為SSEA-1、SSEA-3和SSEA-4。SSEA-1也稱為LeX或CD15,由于它在動物組織中分布的廣泛性引起了科學界較多的關注,因此目前對這一抗原的研究相對來說比較多。我們知道胚胎細胞和腫瘤細胞的分裂速度比成熟組織要快很多,且當正常組織發(fā)生癌變時,經常伴隨著胚胎抗原的出現,這是否也同SSEA等表面抗原的表達有關,現在還仍是疑問。在SSEA-3或SSEA-

3、4的基礎上轉巖藻糖基化、唾液酸化就可形成LeX或SLeX,但是SSEA-3和SSEA-4除在動物胚胎組織中的研究外,目前在成體組織及腫瘤組織中國內對它們的研究甚少,在乳腺組織中的研究更是幾乎空白。進行這方面的研究有助于我們了解胚胎抗原與腫瘤發(fā)生發(fā)展的關系,并且進一步深化我們對腫瘤的發(fā)生機制的認識。
　　 已有研究表明SSEA-1在部分惡性腫瘤中有表達,并且其甚至與某些惡性腫瘤的浸潤、轉移等行為有一定的相關性。在胚胎發(fā)育過程中首先

4、出現的是SSEA-3和SSEA-4,后才出現SSEA-1。到底SSEA-3和SSEA-4是否也同LeX或SLeX一樣參與某些惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程,以及其是通過什么樣的方式參與該過程尚有待于研究。就國內SSEA-3,4在乳腺癌中的研究報道尚少的現狀,本研究主要從乳腺組織及細胞系兩個層面采用免疫組織/細胞化染色法對SSEA-3及SSEA-4在乳腺正常組織、乳腺良性病變組織、乳腺癌組織及乳腺癌細胞系MDA-MB468中的表達分布情況進行研

5、究。旨在探討其與乳腺癌發(fā)生的相關性,借此給乳腺癌的基礎研究及臨床治療提供一定的參考。
　　 材料與方法:
　　 1.材料:組織標本與細胞系
　　 1.1組織標本:50例乳腺癌,50例乳腺良性病變及20例乳腺正常組織標本均來自鄭州大學第一附屬醫(yī)院2006年8月至2007年4月手術標本。并經兩位資深病理學家復查確診。
　　 1.2細胞系:人乳腺癌細胞系MDA-MB468采用10％特級新生小牛血清-DMEM培養(yǎng)

6、基(GIBCO/BRL、高糖),0.02％EDTA和0.25％胰蛋白酶的1:1混合液消化,傳代,在37℃、5％CO2飽和濕度條件下進行貼壁培養(yǎng)。實驗均選用對數生長期細胞(長滿80％)。
　　 2.方法
　　 2.1組織標本切片后采用免疫組織化學SP法檢測SSEA-3和SSEA-4抗原的表達情況。
　　 2.2選四代對數生長期的細胞做細胞爬片；用4％多聚甲醛置于4度冰箱中固定30分鐘；采用免疫細胞化學染色法檢測SS

7、EA-3和SSEA-4的表達情況(SP法同上)。
　　 2.3評分方法:陽性標記強度特征,依照細胞陽性著色程度(抗原含量)可分為以下四個等級:陰性；弱陽性(+)…1分；中等陽性(++)…2分；強陽性(+++)…3分；陽性分布范圍,依照陽性細胞數可分以下四個等級:陰性；弱陽性(+)陽性細胞數在25％以下…1分；中等陽性(++)細胞數在25％-49％…2分；強陽性(卅)陽性細胞數在50％以上…3分。采用積分綜合計量公式計算以上兩評分

8、的乘積<3者為陰性,>4者為陽性,>6者為強陽性,觀察5個高倍鏡視野(HP.)取其平均。
　　 2.4統(tǒng)計學處理:所有數據均采用統(tǒng)計軟件SPSS13.0處理,統(tǒng)計方法采用X2檢驗。當P<0.05時,認為有統(tǒng)計學差異。
　　 結果:
　　 1.SSEA-3及SSEA-4在乳腺癌細胞系MDA-MB468中的表達結果SSEA-3及SSEA-4兩個抗原均可見有較高的陽性表達率,平均>90％。
　　 2 SSEA-

9、3在組織切片中的表達結果
　　 2.1 SSEA-3在乳腺癌、乳腺良性病變標本中均有陽性表達。
　　 2.2 SSEA-3在乳腺癌、乳腺良性病變標本中的陽性表達率分別為34％(17/50)、16％(8/50),且其在ER+乳腺癌標本中的表達陽性率較高(P<0.05)。
　　 2.3 SSEA-3在乳腺正常組織中檢測不到陽性表達結果。
　　 3 SSEA-4在組織切片中的表達結果
　　 3.1 SS

10、EA-4在乳腺癌、乳腺良性病變標本中均有陽性表達。
　　 3.2 SSEA-4在乳腺癌、乳腺良性病變標本中的陽性表達率分別為58％(29/50)、36％(18/50),其在乳腺癌中的表達與標本ER.無明顯相關性(P>0.05)。
　　 3.3 SSEA-4在乳腺正常組織標本中未見陽性表達。
　　 結論:
　　 SSEA-3及SSEA-4抗原在乳腺癌及乳腺良性病變組織中均有表達,且其表達分布特點具有明顯的區(qū)

11、別:SSEA-3和SSEA-4在乳腺癌中的表達較之在乳腺良性病變中的表達陽性率均要高(P<0.05),而在正常乳腺組織中這兩個抗原均未見有陽性表達。因此,推測這兩個抗原可能與乳腺癌的發(fā)生有相關性,在乳腺癌組織中其表達會相應的增多,這給我們對乳腺癌的研究提供了新的方向,并且提示我們對這類抗原與乳腺癌發(fā)生、發(fā)展及預后等的具體相關關系進行研究是有必要的。
　　 另外,SSEA-3和SSEA-4在乳腺癌中可見有陽性表達,陽性率分別為34

12、％(17/50)和58％(29/50),且其在乳腺癌細胞系中表達陽性率也較高,而在正常乳腺組織中未見陽性表達?？紤]到其在乳腺癌及其正常組織有限的表達分布,可以推測這類抗原可能作為一種潛在的碳水化合物為基礎的乳腺癌疫苗的候選抗原,為改善乳腺癌的治療和預后提供新的希望。
　　 我們的實驗還發(fā)現SSEA-3在乳腺癌中的表達與其ER有正向相關關系,而SSEA-4的表達無此特性。
　　 已有研究表明在胚胎發(fā)育時期SSEA-3及SS