杜氏利什曼原蟲(chóng)兩個(gè)發(fā)育階段基因表達(dá)系列分析文庫(kù)的構(gòu)建及HSP90在其階段轉(zhuǎn)變過(guò)程中的作用.pdf

1、上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文杜氏利什曼原蟲(chóng)兩個(gè)發(fā)育階段基因表達(dá)系列分析文庫(kù)的構(gòu)建及HSP90在其階段轉(zhuǎn)變過(guò)程中的作用姓名：李巧麗申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：?jiǎn)讨袞|20090105庫(kù)，只能檢測(cè)已知基因，不能發(fā)現(xiàn)未知基因。因此，本研究以體外培養(yǎng)的前鞭毛體及無(wú)鞭毛體為研究對(duì)象，引入基因表達(dá)系列分析的方法，建立這兩個(gè)發(fā)育階段基因表達(dá)系列分析文庫(kù)，希望為進(jìn)一步的探討其轉(zhuǎn)化機(jī)制，以及轉(zhuǎn)化過(guò)程與宿主的關(guān)系提供更多的線索。在以前的

2、研究中，研究者們報(bào)道了多種利什曼原蟲(chóng)前鞭毛體的培養(yǎng)方法，簡(jiǎn)單重復(fù)文獻(xiàn)中的培養(yǎng)方法沒(méi)有成功得到杜氏利什曼原蟲(chóng)MHOM／CN／Gansu8801種的無(wú)鞭毛體，總結(jié)后我們發(fā)現(xiàn)不同種的利什曼原蟲(chóng)其前鞭毛體的培養(yǎng)步驟和培養(yǎng)條件均有所不同。因此，在本研究中我們首先改進(jìn)了杜氏利什曼原蟲(chóng)MHOM／CN／Gansu8801種無(wú)外源細(xì)胞污染的無(wú)鞭毛體體外培養(yǎng)的方法，得到了大量的無(wú)鞭毛體供后續(xù)研究。接下來(lái)，我們應(yīng)用基因表達(dá)系列分析(Serialanalysi

3、sofgeneexpression，SAGE)的方法建立了杜氏利什曼原蟲(chóng)前鞭毛體及無(wú)鞭毛體兩個(gè)發(fā)育階段基因表達(dá)文庫(kù)。一共獲得總標(biāo)簽數(shù)為40，431個(gè)，在前鞭毛體文庫(kù)和無(wú)鞭毛體文庫(kù)中分別為20，299和20，132個(gè)標(biāo)簽。大約89％的基因在兩個(gè)文庫(kù)中均有表達(dá)，有968個(gè)基因的表達(dá)水平在兩個(gè)文庫(kù)之間有顯著性差異。其中，326個(gè)基因在無(wú)鞭毛體文庫(kù)中是表達(dá)下調(diào)的，642個(gè)基因表達(dá)上調(diào)。我們選取了兩個(gè)文庫(kù)中表達(dá)差異較大的標(biāo)簽，BLAST查找比對(duì)找

4、到28個(gè)標(biāo)簽與其對(duì)應(yīng)的基因，這其中包括histone4，elongationfactor1alpha，alphatubulin，acidicribosomalprotein，LACK，ubiquitin—fusionprotein，40SribosomalproteinS2，40Sribosomalprotein$33，60Sribosomalprotein121，60SribosomalproteinL28等基兇。在這其中，延長(zhǎng)因子1