全反式維甲酸對甲狀腺相關(guān)眼病球后成纖維細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、目的：觀察全反式維甲酸(all trans-retinoic acid，ATRA)對體外培養(yǎng)的球后成纖維細(xì)胞(retroocular fibroblasts，RF)增殖的影響以及ATRA誘導(dǎo)RF凋亡的作用。為ATRA應(yīng)用于甲狀腺相關(guān)眼病(Thyroidassociated ophthalmopathy，TAO)的治療提供理論依據(jù)。 方法：體外培養(yǎng)TAO患者RF細(xì)胞；將不同濃度的ATRA(0、10-9mmol/L、10-8mmol

2、/L、10-7mmol/L、10-6mmol/L和10-5mmol/L)作用于RF細(xì)胞分別達(dá)24h、48h和72h后，于倒置相差顯微鏡下觀察各時(shí)間段各組細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，并用噻唑藍(lán)(MTT)比色法觀察ATRA對細(xì)胞增殖的影響，采用流式細(xì)胞儀檢測ATRA處理48h后細(xì)胞周期的改變及細(xì)胞凋亡的百分率；檢測ATRA處理48h后細(xì)胞內(nèi)bc1-2蛋白的表達(dá)水平。 結(jié)果：體外培養(yǎng)的球后成纖維細(xì)胞生長良好，傳代穩(wěn)定，細(xì)胞呈梭形或分枝狀，細(xì)胞培養(yǎng)

3、24h后，倒置相差顯微鏡下觀察各組細(xì)胞形態(tài)均無明顯變化。10-9mmol/L藥物組即使在72h后細(xì)胞形態(tài)仍未發(fā)現(xiàn)顯著改變。10-8mmol/L、10-7mmol/L藥物組培養(yǎng)72h后及10-6mmol/L、10-5mmol/L藥物組培養(yǎng)48h后，可觀察到部分細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變，細(xì)胞散在分布，形態(tài)變得不規(guī)則且折光性減弱，胞漿中出現(xiàn)顆粒樣物質(zhì)：72h后，10-6mmol/L、10-5mmol/L藥物組細(xì)胞輪廓明顯加深，細(xì)胞老化，生長停滯。MT

4、T法顯示ATRA能降低RF細(xì)胞的光吸收值(A值)，細(xì)胞生長抑制率隨作用時(shí)間和藥物濃度的增加而增加。流式細(xì)胞儀檢測ATRA作用于RF細(xì)胞后，將細(xì)胞周期阻滯在G1期；ATRA可誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡，隨著濃度的增加凋亡率顯著增高；流式細(xì)胞儀檢測ATRA作用于RF細(xì)胞后bc1-2蛋白的表達(dá)水平較正常對照組細(xì)胞明顯下調(diào)。 結(jié)論： 1.ATRA能夠抑制RF細(xì)胞的增殖，其抑制細(xì)胞增殖作用具有時(shí)間和劑量依賴性； 2.ATRA是通過將細(xì)