肺癌H460細(xì)胞與單個(gè)核細(xì)胞、胚肺成纖維細(xì)胞相互作用對(duì)MMP-1，-2，-9表達(dá)的影響及全反式維甲酸對(duì)肺組織破壞的干預(yù)作用.pdf

1、蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文肺癌H460細(xì)胞與單個(gè)核細(xì)胞、胚肺成纖維細(xì)胞相互作用對(duì)MMP1，2，9表達(dá)的影響及全反式維甲酸對(duì)肺組織破壞的干預(yù)作用姓名：閆圣杰申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：呼吸內(nèi)科指導(dǎo)教師：朱運(yùn)奎20100501表達(dá)的影響目的：研究單個(gè)核細(xì)胞、胚肺成纖維細(xì)胞和肺癌H460細(xì)胞三維立體混合培養(yǎng)對(duì)MMP1、MMP2和MMP9表達(dá)的影響，并觀察MMPs對(duì)膠原的降解作用。方法：活性膠原立體培養(yǎng)分為空白對(duì)照組(CG)、H460細(xì)胞組(HG)、單個(gè)

2、核細(xì)胞組(MG)、胚肺成纖維細(xì)胞組(FG)、H460與單個(gè)核細(xì)胞混合組(HMG)、H460與胚肺成纖維細(xì)胞混合組(HFG)、三種細(xì)胞聯(lián)合培養(yǎng)組(HMFG)共7組，觀察癌細(xì)胞的生長(zhǎng)狀況，用明膠酶譜法測(cè)定各組MMP2和MMP9表達(dá)，用Westernblotting法測(cè)定MMP～l。結(jié)果：各組細(xì)胞在立體膠原內(nèi)生長(zhǎng)良好；CG與MG未明顯分泌MMP1、MMP2和MMP9，其余各組均分泌MMP1、MMP2和MMP9，但HMFG分泌的基質(zhì)金屬蛋白酶明

3、顯多于其他各組HG。實(shí)驗(yàn)3全反式維甲酸與彈性蛋白酶對(duì)肺組織破壞的干預(yù)作用目的：采用胚肺成纖維細(xì)胞三維立體培養(yǎng)技術(shù)，直接觀察全反式維甲酸和彈性蛋白酶對(duì)肺的主要成分之一膠原組織降解的干預(yù)作用。方法：在胚肺成纖維細(xì)胞三維立體培養(yǎng)過(guò)程中加入細(xì)胞因子(TNFa和IL113)來(lái)誘導(dǎo)MMPs的表達(dá)，同時(shí)加入RA或NE干預(yù)MMPs或TIMPs的表達(dá)：用明膠酶譜法測(cè)定MMP2、9，用Westernblotting法測(cè)定MMP1，3、及TIMP1，2(金屬

4、蛋白酶抑制因子)，同時(shí)在培養(yǎng)5天后測(cè)定膠原含量及面積大小。結(jié)果：TNFQ和IL113誘導(dǎo)在立體膠原內(nèi)培養(yǎng)的肺成纖維細(xì)胞產(chǎn)生MMP1、3和9，但是只引起少量膠原降解(P005)，同時(shí)加入中性粒細(xì)胞彈力蛋白酶(NE)，結(jié)果導(dǎo)致膠原幾乎完全降解(Po01)。NE使MMP1、2、3和9由非活化的形式轉(zhuǎn)化為較小分子量的活化分子，同時(shí)，清除TIMP1和2。RA抑制了MMP1的表達(dá)及MMP3，9的活化，并削弱了NE對(duì)TIMP1，一2的清除作用，進(jìn)而抑