肺癌H460細胞與單個核細胞、胚肺成纖維細胞相互作用對MMP-1，-2，-9表達的影響及全反式維甲酸對肺組織破壞的干預(yù)作用.pdf

1、蘭州大學碩士學位論文肺癌H460細胞與單個核細胞、胚肺成纖維細胞相互作用對MMP1，2，9表達的影響及全反式維甲酸對肺組織破壞的干預(yù)作用姓名：閆圣杰申請學位級別：碩士專業(yè)：呼吸內(nèi)科指導教師：朱運奎20100501表達的影響目的：研究單個核細胞、胚肺成纖維細胞和肺癌H460細胞三維立體混合培養(yǎng)對MMP1、MMP2和MMP9表達的影響，并觀察MMPs對膠原的降解作用。方法：活性膠原立體培養(yǎng)分為空白對照組(CG)、H460細胞組(HG)、單個

2、核細胞組(MG)、胚肺成纖維細胞組(FG)、H460與單個核細胞混合組(HMG)、H460與胚肺成纖維細胞混合組(HFG)、三種細胞聯(lián)合培養(yǎng)組(HMFG)共7組，觀察癌細胞的生長狀況，用明膠酶譜法測定各組MMP2和MMP9表達，用Westernblotting法測定MMP～l。結(jié)果：各組細胞在立體膠原內(nèi)生長良好；CG與MG未明顯分泌MMP1、MMP2和MMP9，其余各組均分泌MMP1、MMP2和MMP9，但HMFG分泌的基質(zhì)金屬蛋白酶明

3、顯多于其他各組HG。實驗3全反式維甲酸與彈性蛋白酶對肺組織破壞的干預(yù)作用目的：采用胚肺成纖維細胞三維立體培養(yǎng)技術(shù)，直接觀察全反式維甲酸和彈性蛋白酶對肺的主要成分之一膠原組織降解的干預(yù)作用。方法：在胚肺成纖維細胞三維立體培養(yǎng)過程中加入細胞因子(TNFa和IL113)來誘導MMPs的表達，同時加入RA或NE干預(yù)MMPs或TIMPs的表達：用明膠酶譜法測定MMP2、9，用Westernblotting法測定MMP1，3、及TIMP1，2(金屬

4、蛋白酶抑制因子)，同時在培養(yǎng)5天后測定膠原含量及面積大小。結(jié)果：TNFQ和IL113誘導在立體膠原內(nèi)培養(yǎng)的肺成纖維細胞產(chǎn)生MMP1、3和9，但是只引起少量膠原降解(P005)，同時加入中性粒細胞彈力蛋白酶(NE)，結(jié)果導致膠原幾乎完全降解(Po01)。NE使MMP1、2、3和9由非活化的形式轉(zhuǎn)化為較小分子量的活化分子，同時，清除TIMP1和2。RA抑制了MMP1的表達及MMP3，9的活化，并削弱了NE對TIMP1，一2的清除作用，進而抑