miR-29b對與A549細胞共培養(yǎng)的人胚肺成纖維細胞抗纖維化作用的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  特發(fā)性肺纖維化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是一種慢性進展性的病因不明的肺部疾病,且缺乏有效的治療手段。過多的肺成纖維細胞、肌成纖維細胞聚集和細胞外基質(zhì)的過度沉積是IPF的重要病理特點。microRNA是一種小分子非編碼的RNA,在體內(nèi)眾多生理病理過程中扮演重要的角色。研究表明microRNA同樣參與IPF的發(fā)病機理。本研究通過觀察miR-29b對與A549細胞共培養(yǎng)的人胚肺成纖

2、維細胞(MRC-5)合成I型膠原蛋白(Collagen I,Col I)的影響,探討其在抗肺纖維化中的作用,為探尋IPF新的治療靶點提供一定的研究依據(jù)。
  方法:
  應用Transwell小室構建MRC-5與A549細胞跨室共培養(yǎng)模型,利用脂質(zhì)體介導法將miR-29b轉染至MRC-5細胞以及使用TGF-β1刺激相應細胞組,并設空白對照組,TGF-β1刺激組,miR-29b陰性轉染對照+TGF-β1刺激組,miR-29b轉

3、染+TGF-β1刺激組,miR-29b轉染組。通過實時定量PCR法檢測各組細胞中Col I和miR-29b的mRNA相對表達水平。Western blotting法檢測各組細胞中Col I蛋白表達水平。
  結果:
  (1)PCR檢測分析顯示,與空白對照組相比,miR-29b在轉染組表達水平增加了127倍(P<0.01),使用Lipofectamin2000在MRC-5細胞轉染組中過表達miR-29b成功。
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4、)通過PCR檢測分析顯示與TGF-β1刺激組和miR-29b陰性轉染+TGF-β1刺激組相比,miR-29b轉染+TGF-β1刺激組中Col I表達降低(P<0.05)。
  (3)Western blotting法檢測各組細胞Col I蛋白表達,miR-29b轉染+TGF-β1刺激組中Col I表達較TGF-β1刺激組和miR-29b陰性轉染+TGF-β1刺激組相比表達降低(P<0.05)
  結論:
  實驗表明在

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