乙型肝炎病毒X基因影響肝臟細(xì)胞凋亡的機(jī)制探討.pdf

1、背景：近年來乙型肝炎病毒(HBV)的X基因?qū)Ω渭?xì)胞凋亡的影響以及其與肝細(xì)胞癌變的關(guān)系越來越受重視，目前已發(fā)現(xiàn)HBx可以通過多種途徑影響肝細(xì)胞凋亡，但其具體機(jī)制不明。凋亡抑制蛋白家族成員XIAP作為重要的調(diào)亡抑制蛋白在細(xì)胞的調(diào)亡過程中發(fā)揮著重要作用，本研究探討XIAP在HBx影響肝細(xì)胞調(diào)亡和癌變過程中的作用。
　　 目的：研究HBx基因在肝癌細(xì)胞系HepG2及正常肝細(xì)胞系L02中的表達(dá)對細(xì)胞凋亡的影響以及與凋亡抑制蛋白XIAP在細(xì)

2、胞中表達(dá)的相關(guān)性。
　　 方法：
　　 1. 復(fù)蘇及培養(yǎng)HepG2細(xì)胞和L02細(xì)胞系；
　　 2. 構(gòu)建pcDNA3.1-HBx質(zhì)粒并分別瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞和L02細(xì)胞系；
　　 3. RT-PCR檢測HBx基因在轉(zhuǎn)染細(xì)胞中表達(dá)；
　　 4. Realtime熒光定量PCR檢測XIAP基因在轉(zhuǎn)染前后表達(dá)量的差異；
　　 5.免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測XIAP蛋白在轉(zhuǎn)染前后蛋白表達(dá)位置及差異；

3、
　　 6. 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡。
　　 結(jié)果：
　　 1. HBx基因在L02/pcDNA3.1-HBx及HepG2/pcDNA3.1-HBx細(xì)胞中均有表達(dá)，證明轉(zhuǎn)染成功；
　　 2. L02/pcDNA3.1-HBx細(xì)胞形態(tài)改變，由圓形變成梭形，類似于HepG2細(xì)胞系；
　　 3. L02/pcDNA3.1-HBx細(xì)胞中XIAP基因表達(dá)量低于L02細(xì)胞（P<0.01）；HepG2/pcDN

4、A3.1-HBx細(xì)胞中XIAP基因表達(dá)量高于HepG2細(xì)胞（P<0.01）；
　　 4. L02/pcDNA3.1-HBx細(xì)胞中XIAP蛋白表達(dá)較未轉(zhuǎn)染HBx基因L02細(xì)胞少（P<0.05）；HepG2/pcDNA3.1-HBx細(xì)胞中XIAP蛋白表達(dá)較未轉(zhuǎn)染HBx基因HepG2細(xì)胞多(P<0.01）；
　　 5. L02/pcDNA3.1-HBx細(xì)胞凋亡率較L02/pcDNA3.1細(xì)胞升高（P<0.01）；HepG2/p