內(nèi)皮抑素基因對骨肉瘤UMR106細胞生長和轉移的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的: 1、探討內(nèi)皮抑素(ES)基因對骨肉瘤血管生成的作用； 2、探討內(nèi)皮抑素基因對骨肉瘤生長和轉移的影響。 方法: 1、pBudCE4.1/ES重組質(zhì)粒在體外擴增、抽提并酶切和測序鑒定； 2、體外培養(yǎng)骨肉瘤細胞株UM106細胞，應用脂質(zhì)體法進行ES基因轉染，Zeocin抗性篩選獲得陽性細胞克隆(ES-UMR106細胞)，以未轉染UM106細胞為對照，MTT法繪制生長曲線，觀察ES基因對UM106

2、細胞增殖能力的影響； 3、應用ELISA法檢測陽性細胞克隆的ES分泌情況； 4、取ES-LJMR106細胞培養(yǎng)液上清，用于血管內(nèi)皮細胞體外培養(yǎng)，觀察其對血管內(nèi)皮細胞體外增殖能力的影響以評估ES體外活性； 5、分別應用ES-UMR106細胞和UMR106細胞制作裸鼠皮下腫瘤模型，觀察兩組動物的腫瘤生長、侵襲和轉移情況； 6、分別應用ES-UMR106細胞和UMR106細胞尾靜脈注射制作裸鼠肺轉移腫瘤模型，觀

3、察兩組動物肺轉移灶形成、數(shù)量和大小。 結果: 1、在體外擴增pBudCE4.1/ES重組質(zhì)粒，酶切和測序鑒定為陽性重組子； 2、對骨肉瘤UMR106細胞進行成功轉染，可穩(wěn)定表達有生物活性的ES，對體外培養(yǎng)的血管內(nèi)皮細胞增殖具有抑制作用； 3、ES在體內(nèi)可以抑制皮下腫瘤的生長，但沒有降低動物的皮下成瘤率； 4、ES在體內(nèi)可抑制UM106細胞株肺轉移灶的形成和生長。 結論: 1、應用E

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