miR-leT-7a在大白豬甲狀腺中的表達及其細胞凋亡影響的初步研究.pdf

1、microRNA（miRNA）是一類內(nèi)源性的非編碼RNA，廣泛參與細胞的生長發(fā)育、分化、增殖和凋亡等生物學過程。miR-let-7是一種miRNA，而miR-let-7a是miR-let-7家族的重要成員，對細胞的增殖與凋亡的調(diào)控有著重要的作用。
　　為了研究miR-let-7a對豬(Sus scrofa)甲狀腺的生長發(fā)育及其細胞凋亡的調(diào)控作用，本研究利用實時熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測了miR-let-7a在不同生長階段

2、（胚齡60、80、105d和日齡25、60、90、120、150、180d）大白豬甲狀腺組織中的表達量變化;利用間接免疫熒光技術(shù)對甲狀腺組織中特異性表達的甲狀腺球蛋白(TG)進行檢測，從而鑒定了大白豬的甲狀腺組織;通過組織塊消化培養(yǎng)法對甲狀腺細胞進行體外培養(yǎng)，觀察了原代和傳代甲狀腺細胞的基本形態(tài)，采用間接免疫熒光法鑒定了其是否為大白豬甲狀腺細胞和具有正常的功能;通過轉(zhuǎn)染miR-let-7a mimics，并利用流式細胞術(shù)檢測了轉(zhuǎn)染組與未

3、轉(zhuǎn)染組的甲狀腺細胞凋亡率，進而利用生物信息學手段預(yù)測了miR-let-7a與細胞凋亡相關(guān)基因的靶向關(guān)系，用以分析miR-let-7a調(diào)控細胞凋亡的相關(guān)路徑。
　　結(jié)果發(fā)現(xiàn)，甲狀腺組織和細胞中的甲狀腺球蛋白(TG)發(fā)出明顯的綠色熒光，表明體外培養(yǎng)的甲狀腺細胞功能正常。qRT-PCR結(jié)果顯示，胚胎期隨著胚齡的增加，miR-let-7a的相對表達量逐漸增加。出生后miR-let-7a表達量下降，于60日齡達生長期最小值，之后有所上升，至

4、90日齡后其表達量再次下降，120日齡后隨日齡的增加，miR-let-7a表達量呈現(xiàn)逐漸增加的趨勢。凋亡結(jié)果發(fā)現(xiàn)，和對照組相比，轉(zhuǎn)染組細胞凋亡率明顯升高(P＜0.05)。根據(jù)研究結(jié)果推測，miR-let-7a的表達直接或間接影響了甲狀腺細胞凋亡的調(diào)控過程。通過生物信息學軟件預(yù)測得到了大量miR-let-7a的候選靶基因，KEGG通路分析得到了這些靶基因顯著富集的16個通路以及與細胞凋亡通路中的兩個候選靶基因FAS和FASL，推測在甲狀腺